银屑病患者骨髓造血干细胞定向分化为T细胞过程Notch信号转导通路的动态研究

新近我们在国际上首先发现造血干细胞参与银屑病发病。前期研究已取得重要进展，发现银屑病：①骨髓造血干细胞集落形成异常，其变化与p15、21等基因甲基化有关；②骨髓CD34+细胞分化的CD4+CD25+T细胞水平下降；③骨髓CD34+细胞分化的T细胞活性、细胞因子产生及对表皮等作用与银屑病外周血T细胞有很多相似的免疫特性；④银屑病骨髓CD34+细胞Notch受体等表达异常。表明银屑病T细胞异常其内在原因与遗传因素决定的造血干细胞异常有关。Notch信号转导在CD34+细胞自身稳定及向T细胞分化中有重要作用，故我们拟在前期基础上采用荧光定量PCR、Western-blot/蛋白纯化及流式细胞术等对银屑病骨髓CD34+细胞分化T细胞过程Notch信号转导途径中Notch受体、相关转录因子、靶基因等进行动态研究。课题是实质性原创项目，对深入了解银屑病CD34+细胞向T细胞分化异常内在联系很重要。

该项目2010年1月受到国家自然科学基金资助，2012年12月按照原计划基本完成了指标的检测，并进行了引申研究，且对皮肤间充质干细胞及外周血T细胞基因表达模式进行了研究。项目培养硕士研究生7名，目前标注该项目资助已经在国内外核心期刊发表论著17篇，其中3篇在SCI收录杂志发表，另有2篇待刊。.结合国内外研究我们推测骨髓造血干细胞在银屑病的发病中具有重要作用，且已得到证实。表明银屑病T细胞异常与其内在原因与遗传因素决定的造血干细胞异常有关。.Notch信号转导在CD34+细胞自身稳定及向T细胞分化中有重要作用，故在国家自然科学基金资助下我们对银屑病患者Notch信号通路进行了系列及引申研究，结果显示：.①银屑病患者骨髓CD34+细胞Notch1、Hes-1表达水平均高于对照组，Notch2表达在银屑病组及对照组表达水平无显著差异；.②Notch信号通路调控基因-RUNX1及其靶基因SLC9A3R1、HLA-C及PRKCB在银屑病患者骨髓CD34+细胞中表达水平高于对照组，DNA测序未发现在SLC9A3R1与NAT9之间存在RUNX1连接位点的缺失；.③银屑病骨髓基质细胞增殖活性显著低于对照组，自发凋亡率显著高于对照组，培养上清液的IL-6、SCF显著增高，而PDGF、EGF和TNF-α的含量显著低于对照组。体外定向分化银屑病骨髓基质细胞为血管内皮细胞，流式测定显示骨髓基质细胞传至第二代时银屑病组CD34、CD45、ICAM-1、HLA-DR表达水平高于对照组，且诱导的VEC体外血管成形能力较强；.④与对照组相比，银屑病患者外周血T细胞Notch1、Notch2受体mRNA表达水平为对照组的1.8391 、1.84229倍，Notch信号通路的靶基因 Hes-1表达水平为对照组 2.5123倍；.⑤RNA测序分析了NB-UVB治疗前后银屑病外周血基因表达模式，结果显示129个基因在银屑病组存在差异表达且在NB-UVB治疗取得显著临床疗效后表达呈逆转趋势；.⑥采用低血清培养和无血学请培养均能培养出形态均一、成熟的皮肤间充质干细胞，但是低血清法培养细胞所用时间8.93天明显小于无血清培养法所需的15.93天，且低血清法培养出的细胞较无血清培养方法得到的皮肤间充质干细胞的CD44阳性率高，CD45阴性率低。