LncRNA调控子宫内膜癌PTEN表达的分子机制

The mutation of PTEN or aberrant expression play an important role in endometrial cancer development, moreover, the experiment from animal model confirmed that knock out PTEN promote endometrial cancer occur. In our previous and recent work, we found that PTEN was down-regulated in endometrial cancer，more important, parts of lncRNA regulate PTEN expression, but the mechanism is not clear..Base on the result of lncRNA chip assay and prediction of software, some of lncRNA and PTEN have the same microRNA binding element.Therefore, we hypothesis that under pathological and aberrant estrogen condition, aberrant lncRNA regulates PTEN expression by competing binding with microRNA which targeting both lncRNA and PTEN, and subsequently regulates PI3K/AKT signal pathway. To confirm this theory, we will using RIP, real time PCR et. al to investigate the mechanism of lncRNA regulating PTEN from molecular level to tissue level, and to animal model. In addition, we wish we could provide a new insight about the reason of endometrial cancer development and found some of target lncRNA for endometrial cancer therapy.

PTEN突变或异常表达是子宫内膜癌发生的重要分子基础，动物模型提示敲除PTEN促进子宫内膜癌发生。我们前期数据提示PTEN在子宫内膜癌中表达下调，而且部分长链非编码RNA(lncRNA)调控PTEN表达，但其分子机制尚待进一步探讨。根据芯片数据和软件分析，部分lncRNA和PTEN具有某些相同microRNA作用位点，因此，我们提出假设：受病理条件或雌激素影响，异常表达的lncRNA通过与PTEN竞争性地结合可作用于两者的microRNA，进而调控PTEN的表达，以及下游PI3K/AKT信号通路和肿瘤的恶性生物学行为。为证实以上假设，我们拟从分子、细胞、组织和整体动物等不同水平，通过正负向调控lncRNA和microRNA，结合RNA-IP、三维立体培养等技术，探讨lncRNA对PTEN的调控机制；同时希望为子宫内膜癌的治疗提供有效的靶标。

PTEN突变或异常表达是子宫内膜癌发生的重要分子基础，动物模型提示敲除PTEN促进子宫内膜癌发生。我们前期数据提示PTEN在子宫内膜癌中表达下调，而且部分长链非编码RNA(lncRNA)调控PTEN表达，在本研究中进一步确认PTEN在子宫内膜癌中低表达。根据芯片数据和软件分析，发现长链非编码RNA PTENP和PTEN具有相同micro19b作用位点，为了进一步确认PTENP1对PTEN的调控是通过micro19b调控的，我们首先检测了microRNA19b对两者的影响。转染micro19b的mimic后，发现PTENP1的表达明显降低，相反，应用其inhibitor处理后，PTENP1得表达显著上升。说明micro19靶向调控该LncRNA的表达. 为了进一步验证micro19b也作用于PTEN，我们通过real time PCR和WB的方法检测micro19b对其mRNA和蛋白水平的影响。实验发现micro19b mimic显著抑制PTEN的表达。提示micro19b也调控PTEN的表达。.过表达PTEN 的3’UTR上调PTENP1的表达。说明PTEN 的3’UTR吸附了更多的micro19b,导致与PTENP1结合的micro19b减少，从而导致PTENP1表达增加。过表达PTENP1导致PTEN 表达增加。为了验证是否存在双向调控的ceRNA模式，我们构建了PTENP1的表达质粒，并且转染细胞，发现其呈剂量依赖效应地上调PTEN的表达。推测是过表达的lncRNA吸附了更多的micro19b，导致与PTEN结合的micro19b减少，PTEN表达增加。过表达PTENP1导致子宫内膜癌细胞的增殖活性受到抑制。其可能的分子机制是该lncRNA通过ceRNA的模式调控PTEN的表达，PTEN上调，导致其下游的PI3K/AKT信号通路持续活化受到抑制，细胞增殖活性降低。