CML来源的微泡表达HERGK+通道蛋白调节CML细胞功能及格列卫干预作用

最近研究发现以前认为毫无意义的细胞"尘土"- - 微泡（MVs）是生物信息重要载体。白血病细胞释放的微泡是其微环境重要成分。我们在前期工作中首次发现: HERG K+通道蛋白在CML释放 MVs高表达，而正常细胞释放MVs（N-MV）则不表达；初步探讨发现微环境中CML-MVs-HERGK+可调节CML增殖及CMLLSCs扩增；格列卫可以直接作用于HERG1 K+通道，降低HERG K+ 电流。因此,本研究拟在前期工作基础上通过体外细胞试验，动物试验以及临床三个层面深入研究CML-MVs和CML-MVs-HERGK+通道蛋白的特点与CML临床分期的相关性；系统研究CML-MV和CML-MV-HERGK+通道蛋白调节CML LSCs、CML细胞功能以及格列卫干预作用。以期从一个新的角度了解CML、CMLLSCs与其微环境的关系，明确格列卫新的作用靶点及机制，为临床诊治提供理论与实验依据。

本研究主要研究了CML来源的微泡表达HERG1K+通道调节CML细胞功能及格列卫的干预作用。本项目组成员按时保质保量完成本课题研究，取得了丰硕的成果：本项目成果荣获湖北省人民政府颁发的《湖北省科技进步二等奖》一项；已发表12篇SCI收录论文；13篇论文在国际会议上交流，其中在国际肿瘤大会上发言一次，在全国实验血液学大会上发言1次。，还有数篇在评审中。培养博士研究生3名，硕士研究生10名。详细成果如下：.（1）我们发现K562细胞释放的微泡含量明显高于同数量HL-60细胞的释放量。且不同种类白血病细胞微泡都表达CD11b和Annexin V，但表达程度有所差异。（2）发现白血病细胞微泡表达HERG1K+蛋白。白血病细胞HERG1K+通道对微泡释放有调节作用，抑制HERG1K+通道显著降低细胞释放的微泡含量。且释放的微泡上调细胞表面HERG1K+通道表达，其对白血病细胞迁移和黏附有促进作用。（3）我们发现伊马替尼下调HERG1mRNA和HERG1蛋白表达。HERG1K+通道参与伊马替尼诱导的抗白血病增殖、促凋亡。（4）K562微泡能增高ABL1蛋白表达量。阻断K562的HERG1K+通道，能削弱微泡对ABL1的影响。（5）在CML干/祖细胞上有HERG1K+通道蛋白表达。CML-MV对CML干细胞有调节作用。微泡在与细胞接触时，可将微泡内富含的HERG1K+蛋白释放到细胞中，增加细胞HERG1K+蛋白含量。（6）白血病微泡内microRNA与正常微泡microRNA的表达谱有明显差异性。我们筛选出白血病微泡内异常表达的microRNA，其中有部分也出现在肝癌细胞微泡内。我们发现一些共同异常的microRNA有促癌或者抑癌作用。（7）初步研究了耐药和敏感型K562细胞处于缺氧状态下时细胞和其分泌的微泡变化特点。当细胞从正常培养转为缺氧培养后，细胞增殖和微泡分泌受到明显抑制。缺氧相关蛋白HIF-1a，FBP-1，HK-II和GLUT-1在胞内的含量要明显高于在微泡内的含量。此外，我们发现抑制HERG1K+通道能显著增加敏感型细胞对于伊马替尼的敏感性，而抑制HERG1K+通道对于提高耐药型K562细胞对伊马替尼的敏感性无明显效果。（8）我们还研究了髓性白血病细胞TREM-1的表达情况与HERG1K+通道相关性。结果首次证明了髓性白血病细胞低表达TREM-1，且血浆中sTR