蝎毒多肽调控Hedgehog通路逆转CML伊马替尼耐药的机制研究

the appearance of Tyrosine Kinase Inhibitor (TKI), imatinib has increased the curative effect of chronic myelogenous leukemia (CML) enormously , but there was about 30% of cases resistant or intolerance to TKIs, research of TKI resistance encounter bottlenecks in CML, the newest research suggests that the Hedgehog (Hh) pathway activation associated imatinib resistant, and our earlier studies have shown that peptide extract from scorpion venom(PESV) can inhibit the activation of CML Hh pathway, based on this research hypothesis is proposed: The CML in Hh pathway activation leads to the imatinib resistant, PESV can inhibit imatinib drug-resistant CML the Hedgehog pathway of upstream factors SHH, Smo, Ptch and downstream the expression of nuclear transcription factors Gli, reverse imatinib resistant. This study use the specific expression of BCR- ABL fusion gene K562 cells for the study, to establish imatinib resistant cell line K562/R, and in cells and animals levels to explore PESV reversal of drug resistance mechanism, improve the theoretical basis for clinical, control the percentages of resistance, having good social and scientific significance.

酪氨酸激酶抑制剂（TKI）伊马替尼的出现使慢性粒细胞白血病（CML）的疗效极大提升，但仍有约30%的病例对TKI耐药，目前对于CML TKI耐药的研究遭遇瓶颈，最新研究表明伊马替尼耐药与Hedgehog（Hh）通路活化相关，本课题前期研究表明蝎毒多肽（PESV）可抑制CML Hh通路的活化，基于此研究基础提出假说：CML中Hh通路的活化导致了其对伊马替尼耐药，PESV可通过抑制Hh通路上游配体蛋白SHH、Smo、Ptc以及下游核转录因子Gli的表达，抑制该通路的活化，逆转伊马替尼耐药。本研究以特异性表达BCR-ABL融合基因的K562细胞为研究载体，建立伊马替尼耐药细胞株K562/R，并在细胞和活体动物两个水平探讨PESV逆转耐药的机制，为临床提供理论依据，降低患者耐药率，具有良好的科学和社会意义。

酪氨酸激酶抑制剂（TKI）伊马替尼的出现使慢性粒细胞白血病（CML）的疗效极大提升，但仍有约30%的病例对TKI耐药，目前对于CML TKI耐药的研究遭遇瓶颈，最新研究表明伊马替尼耐药与Hedgehog（Hh）通路活化相关，本课题在前期研究的基础上，以特异性表达BCR-ABL融合基因的K562细胞为研究载体，利用有限稀释法进行单克隆筛选建立伊马替尼耐药细胞株K562/R，体外实验方面：应用CCK-8法检测蝎毒多肽（PESV）对K562/R细胞增殖抑制率，应用流式细胞术检测细胞凋亡率，用PCR、Western blot法检测各组细胞上游活化因子Shh、Smo、Ptch基因mRNA及蛋白的表达、下游活化因子PKA、SuFu、Gli1的表达。体内实验方面：取BALB/c裸鼠60只，皮下注射每次间隔3d,每次注射K562/R细胞悬液0.2ml(5×10~7/m L)，形成皮下瘤块备用，各组按设定方法给药，观察小鼠生存状态、体重的变化，21天后处死，剥离瘤块称重，计算各治疗组的抑瘤率，取瘤组织提取单个核细胞悬液，应用RT-PCR、Western blot检测各组小鼠瘤组织细胞上游活化因子Shh、Smo、Ptch基因mRNA及蛋白的表达、下游活化因子PKA、SuFu、Gli1的表达。研究结果表明：PESV对K562/R细胞具有抑制增殖、促进凋亡的效应，PESV可通过抑制Hh上游配体蛋白和下游和转录因子的表达，抑制Hh通路的活化，从而逆转伊马替尼耐药。本研究为进一步揭示CML中伊马替尼耐药的机制及其效应靶点的确认提供了科学依据。