禽新城疫耐热活疫苗载体的构建与评估

重组的低毒耐热病毒作为新型的活疫苗载体具有巨大的优势和应用前景。然而，自然界中绝大多数病毒对温度十分敏感，低毒耐热的病毒是十分稀缺的资源。课题组在前期工作－耐热选育到的低毒耐热新城疫病毒HB92株的基础上，拟进一步通过耐热选育和蚀斑纯化方法，选育增殖滴度较高、免疫源性和耐热性能优良的新毒株，通过对新毒株全基因组序列测定和反向遗传操作系统的建立，构建首个禽新城疫低毒耐热活疫苗载体。分析外源绿色荧光蛋白（GFP）基因在耐热新城疫病毒载体内的表达效力和遗传稳定性,评估该载体的使用价值。为研发新城疫、禽流感等主要禽类疫病的多价（联）耐热活疫苗和探讨新城疫病毒的耐热机制奠定坚实的技术平台。

重组的低毒耐热病毒作为新型的活疫苗载体具有巨大的优势和应用前景。然而，自然界中绝大多数病毒对温度十分敏感，低毒耐热的病毒是十分稀缺的资源。课题组在前期工作--耐热选育到的低毒耐热新城疫病毒V4/TS09株的基础上，进一步通过培养条件优化、细胞传代培养和极限稀释法纯化，获得了一株新的、纯化的、适应BHK-21细胞的、耐热弱毒新城疫毒株TS09-C株。完成了TS09-C株的全基因组序列测定和反向遗传操作系统的构建，成功构建了禽新城疫低毒耐热活疫苗载体。通过外源GFP基因在TS09-C株耐热活疫苗载体中的表达与优化，确定以融合自切割的方式在载体的M基因位置进行外源基因的插入与表达为最优化方案。为研发新城疫、禽流感等禽类主要疫病的多联（多价）耐热活疫苗和探讨新城疫病毒的耐热机理奠定了坚实的技术平台。