阻断Hedgehog信号通路对宫颈癌侵袭和转移的作用

Hedgehog（Hh）信号通路可促进各种恶性肿瘤细胞的增殖，而且该通路的过度激活还会提高肿瘤细胞的侵袭性。通过阻断Hh信号通路表达可有效遏制多种肿瘤的发生和侵袭转移，但宫颈癌却未见报道。申请人前期研究中发现，应用该通路抑制剂-cyclopamine可有效抑制宫颈癌细胞的增殖。因此本项目拟采用cyclopamine和siRNA干扰技术阻断该通路后，结合MTT法、免疫荧光染色、RT-PCR、Western Blot、细胞周期与凋亡检测、软琼脂实验、Transwell迁移实验及体外侵袭实验等方法，探讨阻断Hh信号通路对宫颈癌细胞的增殖和凋亡的有效机制，阐明阻断该通路对宫颈癌细胞的集落形成能力，迁移及体外侵袭能力的作用。这将有效揭示该通路抑制对宫颈癌侵袭和转移的作用和机制；为宫颈癌靶向治疗找出新靶点。

Hedgehog（Hh）信号通路可促进各种恶性肿瘤细胞的增殖，而且该通路的过度激活还会提高肿瘤细胞的侵袭性。本课题应用免疫组化方法在宫颈癌和癌前病变中检测了Hh信号通路的相关蛋白的表达，并用PCR法检测了宫颈癌组织中HPV16型的感染情况。采用cyclopamine阻断宫颈癌Siha细胞的Hh信号通路后，结合MTT法、RT-PCR、Western Blot、软琼脂实验、Transwell迁移实验及体外侵袭实验等方法，检测了Hh信号通路对宫颈癌细胞的增殖、集落形成能力、迁移及体外侵袭能力的作用。研究结果示：Hh信号通路的shh，Ihh，smo，ptch，Gli1，Gli2，Gli3基因蛋白表达在宫颈癌组织明显增高，而且shh、Gli1和Gli2的表达与HPV16型感染有密切相关。Hh通路抑制剂-cyclopamine可有效抑制宫颈癌Siha细胞的增殖。用20uM、10uM、5uM不同浓度的cyclopamine处理宫颈癌Siha细胞24h，48h，72h后Ihh和Gli-1基因RNA和蛋白在72h的20uM 组不表达；Ptch 基因RNA和蛋白是在处理48h和72h时，20uM组表达量比其他组明显减少；Smo的RNA和蛋白表达是在处理48h时20uM组、处理72h时20uM、10uM 组表达量比其他组明显减少。宫颈癌Siha 细胞用cyclopamine处理24h时20uM组transwell迁移的细胞数明显少于未处理组；而且10uM和20uM处理组transwell侵袭细胞数明显少于未处理组。软琼脂克隆形成实验结果10uM和20uM 的cyclopamine处理组形成的细胞集落数显著少于对照组。通过本课题阐明了Hh信号通路对宫颈癌组织的临床病理学意义及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用，为宫颈癌的靶向治疗提供了理论依据。并在国际刊物上发表了SCI论文1篇，国家级和省级核心刊物发表了9篇，获吉林省科技进步二等奖1项和吉林省第七届自然科学学术成果三等奖1项。通过此课题为边疆少数民族地区培养了2名 硕士研究生。