人工抗原递呈细胞体外特异性扩增初始CD8T细胞的研究

采用重组肿瘤抗原肽-MHC I方法，构建多种人工抗原递呈细胞，模拟体内条件，在IL-2、 IL-4、 IL-7、 IL-15等细胞因子刺激及灭活自体外周血淋巴细胞滋养下，与HLA-A2阳性健康者外周血初始CD8+T细胞共培养，调整pMHCI/TCR、细胞因子等扩增信号，特异性扩增出肿瘤抗原特异性CD8+T细胞，检测扩增的CD8+T细胞特异性，扩增指数，纯度，特异性杀瘤作用及IFN-γ分泌活性，深入揭示初始CD8+T细胞特异性扩增的规律，摸索建立体外扩增初始CD8+T细胞的稳定方法，抢占国际免疫基础、临床应用研究制高点。

课题组分步骤成功构建了分泌性融合蛋白p-β2M-HLA-A2-Fc (pβA2Fc)，C1R/p-β2M-HLA-A2(C1R/pβA2)以及T2等多种人工抗原递呈细胞。运用人工抗原递呈细胞与肿瘤患者外周血CD8+T细胞共培养，通过检测IFN-γ的分泌，我们检测到非小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌患者体内肿瘤抗原肽特异的CD8+T细胞，其中CEA 特异性CD8+T 细胞频率最高，HER-2/neu 特异性CD8+T 细胞次之，而EGFR 特异性CD8+T 细胞较低。这些频率较高的CEA、HER-2/neu 特异性CD8+T 细胞将进一步进行扩增实验。..课题组进一步运用T2细胞结合CEA、HER-2/neu，在IL-2及灭活的自体淋巴细胞的滋养下，与非小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌患者外周血PBMC共培养。多轮循环扩增后，这些CEA、HER-2/neu 特异性的CD8+T细胞被有效扩增出来。扩增指数由扩增前流式细胞仪难以检测的0.0%到扩增后的1-8%。经过优化扩增条件，发现在浓度不高于40ng/ml 的情况下，添加的rhIL-2 浓度越高，肿瘤抗原肽特异性的CD8+T 淋巴细胞扩增越好，同时通过对不同的T2 细胞与PBL 的比例对扩增效果影响的研究，判断出当T2 细胞：PBL=1：100 为最佳扩增比例。..课题组运用T2细胞和合成的肿瘤抗原肽作为人工抗原递呈细胞，尝试将多名健康者体内自发产生的肿瘤特异性CD8+T细胞扩增出来，但扩增的数量较低。 分析原因可能为健康者体内自发产生的肿瘤特异性CD8+T细胞数量极少，这极大增加了扩增难度。课题资助期结束后，我们将继续调整T2细胞、抗原肽、细胞因子的浓度，进行进一步扩增。..该课题发表相关SCI论文一篇，培养博士生2名，硕士生1名。