miR-204调控Notch1信号途径影响滋养层细胞侵袭转移参与子痫前期发病的机制研究

Preeclampsia(PE) is a leading cause of premature, intrauterine growth retardation and perinatal mortality, and lack of effective treatment in clinical. Applicants found that Notch1 affected the invasion, migration and EMT of trophoblast involved in PE. Preliminary study showed that the expression of miR-204 in PE placenta was abnormally elevated. Bioinformatics prediction and experiment results suggested that Notch1 may be a target gene of miR-204, therefore we speculate that miR-204 plays an important role in PE by the regulation of multiple target genes. This project intends to investigate the influence of miR-204 in the invasion,metastasis and epithelial-mesenchymal transition of trophoblast cells in vitro and in vivo. Based on this, the role of miR204 on the incidence of PE will be analysed. This study will provide new ideas for pathogenetic explanation and early diagnosis of preeclampsia.

子痫前期（PE）是引发早产、宫内生长受限以及围产期孕产妇死亡的主要原因，临床尚无有效的治疗措施。申请者前期研究中发现Notch1通过调节其下游信号通路影响滋养层细胞的侵袭、迁移以及上皮-间质转化参与子痫前期的发病。前人研究发现miR-204在子痫前期患者胎盘组织中呈异常高表达，我们的生物信息学预测以及前期实验结果均提示Notch1为miR-204的潜在靶基因，因此推测miR-204通过对其多个靶基因的调控参与了子痫前期的发病过程。本项目将通过体内体外实验观察miR-204对滋养层细胞侵袭转移的作用并深入探讨其机制，并且结合临床病例分析miR-204对PE发病的指示作用，以期为子痫前期发病机制研究以及其早期诊断提供新的思路。

子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期特有的一种疾病，是导致围产期母儿死亡的主要原因。大部分学者认为滋养层细胞浸润不足，致使胎盘缺血缺氧是PE发病的主要原因。微小RNA（microRNA，miRNA）通过与靶基因mRNA 3'非翻译区互补结合调控mRNA的切割、降解，对基因表达调控起到重要作用。研究表明，作为miRNA家族成员之一，miR-204可以通过对多个靶点的调控参与肿瘤细胞浸润转移过程；而滋养层细胞侵入子宫内膜的过程与肿瘤细胞浸润转移过程高度相似。研究还发现，miR-204在PE患者胎盘组织中呈异常高表达，然而，其在PE中的作用与机制却鲜有报道。本研究旨在阐明miR-204在PE中的作用与机制，并探讨miR-204在PE中异常表达的原因。本研究通过生物信息学网站预测分析发现，miR-204与MMP9及miR-204与LncRNA-TUG1均存在结合位点，通过双荧光素酶报告基因检测实验进行验证；通过构建miR-204模拟物与抑制剂、MMP9过表达与沉默载体、LncRNA-TUG1过表达载体与siRNA干扰片段，（共）转染对数生长期滋养层细胞（BeWo细胞、JEG-3细胞、HTR-8/SVneo细胞与JAR细胞），利用Real-time PCR技术与Western blot技术检测miR-204、MMP9与LncRNA-TUG1的表达，分析miR-204、MMP9与LncRNA-TUG1之间的调控作用，通过细胞划痕实验与Transwell实验检测滋养层细胞的侵袭与转移能力，进而阐明miR-204在PE中的作用与相关分子机制。本研究结果显示，miR-204与MMP9、miR-204与LncRNA-TUG1均存在靶向关系（相互调控作用）；在PE中，miR-204能够通过靶向抑制MMP9的表达，降低滋养层细胞的侵袭与转移能力，造成滋养层细胞浸润不足，阻碍了胎盘着床，促进PE的病理进程，而miR-204在PE中的异常表达可能与LncRNA-TUG1的ceRNA作用密切相关，且LncRNA-TUG1能够通过结合与抑制miR-204的表达，进而减轻miR-204对MMP9的靶向调节作用，逆转miR-204对PE的影响。本研究结果进一步阐明了PE的发病机理，为PE的临床诊断与治疗提供了提供了新靶点与新视野，具有重要的理论与实际意义。