KIR-A/A单体型的HSCT中KIR2DS4基因型别及表达水平差异与aGVHD发生的相关性及其机制

临床研究表明，KIR(killer Ig-like receptor)型别与HSCT后aGVHD发生有关，其机制尚不清楚。申报者前期研究发现，KIR-A/A单体型中唯一的aKIR(KIR2DS4)基因型与aGVHD发病明显相关，据此推测：KIR/HLA受配体缺失，可过度激活KIR2DS4并使之高表达，继而介导跨膜受体DAP12所含ITAM磷酸化，促进NK细胞细胞毒效应并释放IFN-γ、IL-15等细胞因子，导致aGVHD发生。本项目拟建立KIR/HLA受配体缺失实验体系并结合临床病例实验，采用基因克隆测序，流式细胞术，定量PCR和蛋白功能检测等方法，从供者NK细胞所携带KIR基因的型别及表达水平的角度，探讨aGVHD发生、发展的机制。本项目的意义是：为临床判断HSCT患者预后提供重要指标；提供实验依据，证明选择HSCT供体时有必要进行KIR基因型别分析；为防治GVHD发病提供新思路。

NK细胞是异基因造血干细胞移植(HSCT)后最早重建的淋巴细胞亚群，其中NK细胞表达的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因是在HSCT中除HLA基因外引起aGVHD和影响OS的另一重要因素。本项目通过应用SSP、基因测序(SBT)、流式细胞术等实验方法和建立体外KIR/HLA受配体模式；结合移植前后建立的动态随访体系和临床资料（预处理方案、aGVHD、OS、RFS等），阐述在HSCT中供受者在KIR-A/A和B/x单体型中等位基因频率分布不同、移植前后供受者KIR2DS4和KIR2DL1表达差异，以及KIR/HLA受配体模式对HSCT预后的影响。研究成果：①建立SBT方法进行KIR2DS4高分辨基因分型技术平台，证实KIR2DS4有4种等位基因型,KIR2DS4*00101是中国汉族人群中比例最高的等位基因；建立了中国汉族人群KIR-A/A和KIR-B/x单体型的分型标准，其KIR基因型、单体型、着丝粒和端粒端基序频率与其他种族存在差异性。②在异基因HSCT中供受体KIR基因不合OS和RFS明显高于相合者；供者KIR单倍体分型为B/B，B/x2的OS高于A/A，B/x1；供体KIR含Cen-B时OS和RFS明显提高，而复发率明显下降。③当供者为完整型KIR2DS4*00101等位基因时OS最低；Ⅲ-Ⅳ度 aGVHD最高；而供者为2DS4*003-007基因时CMV感染发生率低。④在HSCT后1个月NK细胞表达最高，而KIR基因呈低表达，2-3个月KIR基因成熟和高表达表现为有异源反应活性杀伤白血病细胞。受体为HLA-C1组aGVHD发生率明显下降，而C2组是发生aGVHD的危险因素。当供者为A/A型，在AML/MDS患者移植后1、2个月KIR2DS4阳性细胞百分率及平均荧光强度在发生aGVHD时明显升高；在体外KIR/HLA受配体模式中NK细胞与DC细胞比例大于2.5:1时，NK细胞过度活化诱导KIR2DS4基因高表达，初步证实KIR2DS4过度激活可引发aGVHD，KIR基因成熟促使NK细胞发挥杀伤作用。因此，本项目建立的中国汉族人群KIR基因单体型的分型标准，为在HSCT中应用供受者KIR基因分型和KIR/HLA错配模式分析选择最合适供者提供令人信服的实验依据。KIR2DS4基因表达差异与aGVHD发生密切相关，为临床上判断、预防和治疗aGVHD提供了新思路。