高效表达抗体的腺病毒/腺相关病毒复合载体系统研制

抗体治疗是目前肿瘤治疗效果最明确的方法之一，但费用昂贵。本课题组在国际上率先提出并建立全长抗体基因治疗策略，应用复制缺陷型腺病毒在体内直接表达全长抗体基因，绕过体外繁琐的抗体生产纯化过程，大幅降低抗体治疗成本。但该系统距离实际临床应用仍存在抗体表达量不足、时间不够长的问题。国际上亦有采用腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）表达全长抗体基因，其表达量高、时间长，但由于AAV包装量小，抗体表达难以调控，表达时间太长，会导致副作用。本研究在原有复制缺陷型腺病毒表达全长抗体基因的基础上，引入AAV载体核心元件ITR，建立新型腺病毒/腺相关病毒复合载体，利用ITR序列能提高、稳定和延长外源基因的表达的特性，高效表达抗体，适当延长抗体表达时间，并引入TK基因在合适的时间关闭抗体表达。因此，这种新型全长抗体基因治疗平台有望使全长抗体基因治疗从实验室进入临床。

抗体治疗肿瘤具有明确的疗效，但是存在难以进入实体瘤内部以及治疗费用昂贵等问题。本课题组在国际上首先提出了复制缺陷型腺病毒表达全长抗体基因治疗的方案，在解决上述问题方面取得了一系列进展，发表了多篇具重要学术价值的论文并申请了相应的国内外专利。通过本课题研究进一步提出和建立了基于腺病毒/腺相关病毒的全长抗体表达系统，在保持原有腺病毒表达全长抗体的优势基础之上，解决了复合病毒难以生产、抗体在肿瘤局部表达量低、表达时间短、抗体表达不受调控等一系列关键问题，大大提高了复合病毒的生产滴度、进一步提高了抗体的表达量和全长抗体基因治疗的安全性：（1）引入腺相关病毒的ITR序列，抗体密码子优化以及转染CIK/NK/TIL等免疫细胞，大大提高了抗体在肿瘤局部的表达浓度和表达时间。Ad5F35/ITR-Avastin-TK病毒转染CIK细胞，2天后在细胞上清中的Avastin的表达量即可达(640.26±20.21)ng/ml；（2）通过引入TK基因来调控抗体表达，增加了其安全性；（3）将293细胞特异性高水平表达的4个拷贝miR-15a的靶序列插入抗体基因的3’UTR中，抑制抗体在293细胞内的表达，提高重组病毒的生产滴度。通过本项目的研究，培养了7名硕士研究生， 发表了4篇论文和申请并获授权专利1项。