5′-triphosphate-siRNA逆转HBV诱导的NK细胞功能低下的机制研究

NK cells exert important anti-viral effects. However, the function of NK cells was impaired during HBV infection, and the mechanisms of dysfunction of NK cell were not well understood yet. Our previous study demonstrated that 5′-triphosphate-HBx-siRNA may not only directly inhibit HBV replication, but also stimulate innate immunity against HBV in hepatocytes. This subject intends to investigate whether NK cells within the liver respond to immune stimulations induced by 3p-siRNA and the the impaired function of NK cells is reversed. Bifunctional siRNAs with both gene-silencing and innate immune-activation properties represent a new potential strategy for the treatment of viral infection.

NK细胞发挥重要的抗病毒效应。然而，HBV感染可导致NK细胞功能下降，其机制尚不十分清楚。我们前期研究证明，兼具靶基因沉默作用和免疫激活作用的5′-triphosphate-HBx-siRNA可通过活化RIG-I信号通路激活肝细胞中的天然免疫应答，从而发挥有效的抗HBV效应。本研究拟在此研究基础上，以NK细胞和HBV小鼠为研究模型，利用分子生物学和细胞生物学技术，分析HBV感染介导NK细胞功能低下的机制；通过体内外实验证实5′-triphosphate-HBx-siRNA活化肝细胞后，诱导分泌细胞因子，进而激活肝脏NK细胞，发挥更有效的抗病毒效应，为更合理地设计HBV治疗方案提供依据。

HBV感染可导致NK细胞功能下降，其机制尚不十分清楚。我们研究发现，HBV可通过胞外体途径进入NK细胞直接抑制NK细胞的功能，还可通过调控Fas/Fas L、Tim-3/Galectin-9等信号通路影响NK细胞的杀伤功能。更为重要的是，我们设计了一种基于RNAi技术的双功能3p-siHBx，其一方面可通过RNAi途径沉默HBx基因，从而抑制HBV复制，另一方面可激活肝细胞内RIG-I信号通路，旨在研究双功能3p-siHBx逆转HBV导致的NK细胞功能耗竭的机制。我们以HBV慢性感染小鼠为研究对象，进一步明确了3p-siHBx对多种免疫细胞的影响。结果发现：（1）双功能3p-siHBx可显著抑制HBV的复制；（2）双功能3p-siHBx可逆转肝脏NK细胞的免疫抑制功能；（3）3p-siHBx可以有效抑制HBV感染小鼠MDSC的功能；（4）双功能3p-siHBx的抗HBV效果部分依赖于RIG-I信号通路。这些研究结果提示我们，双功能3p-siHBx可有效逆转NK细胞功能，发挥有效抗HBV的效果；而阻断与NK细胞耗竭相关的“checkpoint”分子如Tim-3亦有良好的抗HBV前景。