牦牛卵泡发育过程中雌激素对其受体表达的调控及其与细胞凋亡关系的研究

Estrogen secreted by ovarian feedback-regulates follicular atresia or maturation, and follicular atresia caused mostly by cell apoptosis. In different tissue, estrogen binding to its different receptor subtypes(ERα/ERβ)could promote or inhibit cell apoptosis.Our Previous studies showed respectively that, in rat brain estrogen could up-regulate the expression of ER, and could up-regulate Bcl-2;expression of ERα in yak uterus were differed with stages of the estrous cycle.But,there is no any report about expression of ER in yak ovay, and the mechenism of cell apoptosis during yak follicular development is still unclear.In order to investigate the mechanism of estrogen regulating cell apoptosis during yak follicular maturation, and lay a theoretical foundation to improve yak ovarian reserve capacity and yak fecundity, in this project, effect of estrogen on expression of ER subtypes, apoptosis relative genes (including Bcl-2/Bax，Fas/FasL，Caspase-1，Caspase-3，Caspase-9) and cell apoptosis in yak ovay during follicular development will be analyzed by immunohistochemistry, hybridization in situ and RT-PCR in vivo and in vitro.

生理状态下卵巢分泌的雌激素反馈调节卵泡闭锁或成熟，而卵泡闭锁最重要的诱因是细胞凋亡。不同组织中雌激素与其不同受体(ERα/ERβ)结合，促进或抑制细胞凋亡。申请人前期研究发现，雌激素能上调大鼠脑中雌激素受体和Bcl-2的表达，抑制神经元凋亡；近期研究结果表明，牦牛子宫中有ERα的表达，并随发情周期不同出现规律性变化。但有关牦牛卵巢中雌激素受体的表达及卵泡发育过程中细胞凋亡的机制未见相关报道。因此，本项目拟以牦牛为研究对象，利用免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR等方法，通过在体和离体研究，探讨雌激素对卵巢中雌激素受体(ERα/ERβ)表达的调控机制及其与卵巢细胞凋亡和凋亡相关基因(Bcl-2/Bax，Fas/FasL，Caspase-1，Caspase-3，Caspase-9)表达的相互关系，阐明雌激素对牦牛卵泡发育过程中细胞凋亡的调控机制，为提高牦牛卵巢储备能力和繁殖性能提供新思路。

为了探讨雌激素对牦牛雌激素受体表达的调控机制及其与卵巢细胞凋亡和凋亡相关基因表达的相互关系，阐明雌激素对牦牛卵泡发育过程中细胞凋亡的调控机制，本项目按照任务书完成了全部的研究工作，得到如下结果：.1．牦牛卵巢较小，右侧卵巢大于左侧卵巢，但无显著差异，右侧子宫角怀孕率大于左侧；.2．发情期牦牛ER mRNA在下丘脑中大量表达。在卵巢中ER蛋白主要定位于卵泡及黄体细胞中，在下丘脑中ER蛋白主要定位于大小神经元中，在松果体中主要定位于松果体细胞的突触带和突触小球内，在垂体中主要定位于嗜酸性和嗜碱性细胞内。.3．ERα和ERβ mRNA在牦牛黄体期卵巢中表达最高，乏情期较低，而在卵泡期表达最低。乏情期牦牛输卵管及子宫体中ERα表达高于卵泡期。卵泡期和黄体期以及妊娠早期，牦牛卵巢、输卵管和子宫中ERβ mRNA较ERα表达高。.4．Bcl-2和Bax蛋白在卵巢中主要定位于卵泡颗粒细胞和卵泡间质，Bax在退化卵泡中表达强；在输卵管中主要表达于上皮细胞的胞浆或胞膜中，卵泡期Bcl-2表达量显著高于黄体期，而Bax表达量则显著低于黄体期。.5．雌激素促进牦牛卵泡颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞的生长，雌激素阻断剂则抑制雌激素对细胞的促生长作用。雌激素上调Bcl-2的表达，下调Bax表达。雌激素对大鼠下丘脑中Bcl-2和Bax的表达具有相同的调节作用。.6．Fas主要表达于卵巢皮质部卵泡颗粒细胞的细胞质中，髓质部较少。卵泡腔圆润、颗粒细胞均匀的卵泡中Fas表达强度比卵泡膜皱缩、卵泡液少的卵泡弱。.7．繁殖季节牦牛松果体中褪黑素受体主要定位松果体细胞突触带和突触球内；在下丘脑主要表达于大小型神经元内；垂体中则主要表达于α细胞和β细胞；卵巢中主要表达于卵泡、卵母细胞和黄体中。牦牛子宫基质细胞和肌层平滑肌细胞中均有褪黑素受体蛋白表达，并随妊娠期不同出现规律变化。.以上结果为进一步全面阐明雌激素对牦牛卵泡发育过程中细胞凋亡的调控机制奠定了理论基础，为生产中通过激素手段提高牦牛卵巢储备能力和繁殖性能提供了科学依据。