基于玄府理论研究发汗法和固摄法治疗PAN肾病大鼠蛋白尿的TRPC机制

The “Xuanfu” is porokeratosis in《Huangdi's Internal Classics》，Liu Wansu further expands the Xuanfu theory，called "it’s the portal of ascending-descending and exiting-entering of Qi"." Xuanfu " is similar to podocyte slit diaphragm in morphology,characteristic, function, pathology and clinical manifestation.Recent studies show that transient receptor potential channel (TRPC) 5、6 were antagonistic to each other through activating Rac1 and RhoA , balancing calcium signal,regulating podocyte cytoskeleton and influencing slit diaphragm,Their abnormal expression leading to proteinuria.Our previous clinical studies showed that the method of diaphoresis and consolidation can cure the foot process effacement and reduce proteinuria.Based on the above basis,we propose "Xuanfu - podocyte slit diaphragm" hypothesis,that the podocyte slit diaphragm is the Xuanfu of kidney,the foot process effacement is Xuanfu counterpoise dysfunction,the balance of TRPC5/TRPC6 is the key of Xuanfu counterpoise.The method of diaphoresis and consolidation may regulated the balance of TRPC5/TRPC6 through different angles and influenced the podocyte slit diaphragm.This study induce the foot process effacement by puromycin aminonucleoside, establish the animal model of minimal change and focal segmental glomerulosclerosis, taking the balance TRPC5/6 as the starting point,research the Mechanism of yuebi Tang and Gujing Fang in the treatment of proteinuria,explore the therapeutic target of the method of diaphoresis and consolidation and reveal the essence of "Xuanfu".

《内径》中玄府为汗孔，刘完素进一步发展玄府理论称其为“气出入升降之道路门户”。肾脏足细胞裂隙隔膜在形态、特性、功能、病理、临床表现上与玄府高度相似。最近研究表明瞬时受体电位阳离子通道（TRPC）5、6分别激活Rac1、RhoA相互拮抗平衡钙信号、调控足细胞骨架影响裂隙隔膜，其表达异常均导致蛋白尿。我们前期研究证实发汗法和固摄法均可改善足突融合、减少蛋白尿。基于以上基础，我们提出“玄府-足细胞裂隙隔膜”假说，认为足细胞裂隙隔膜是肾脏中的玄府，足突融合即玄府开阖失司，TRPC5/TRPC6的平衡与否是玄府开阖的关键；发汗法和固摄法可能从不同角度调节TRPC5/TRPC6平衡而影响足细胞裂隙隔膜。本研究通过嘌呤霉素氨基核苷诱导足突融合，建立微小病变及局灶节段硬化肾病动物模型，以TRPC5/TRPC6平衡为切入点，研究越婢汤和固精方治疗蛋白尿的机制，探寻发汗、固摄二法的作用靶点，揭示“玄府”实质。

背景：中医“玄府”与肾小球足细胞裂隙隔膜存在高度相似性，瞬时受体电位阳离子通道5（TPRC5）/TRPC6可能是调控玄府开阖的重要分子和汗法、补法治疗蛋白尿的作用靶点。.内容：80只雄性Wistar大鼠按体重随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组。采用首剂静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（PAN）90mg/kg模拟微小病变（MCD）模型，随后分别于第13、16、19、22、25天追加PAN 9mg/kg建立局灶节段硬化（FSGS）模型，造模周期分别为2周和8周。检测血生化指标、尿蛋白排泄，TPRC5、TRPC6表达及分布，足细胞结构分子及骨架蛋白F-actin表达，光镜观察肾小球病理，电镜观察足细胞超微结构。.结果：与正常组比较，PAN大鼠造模2周出现低蛋白血症、蛋白尿、高脂血症、腹水等肾病综合征表现，病理符合微小病变；8周大鼠出现低蛋白血症，蛋白尿及FSGS表现，两阶段TRPC5、TRPC6、RHoA、Rac1表达均上调，足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin、Synaptopodin表达减少，骨架蛋白F-actin表达下降（P<0.05）及足突融合。MCD阶段，与模型组比较，越婢汤组与固精方组尿蛋白排泄均降低，血清胆固醇、甘油三酯下降，血清白蛋白升高，TRPC5、TRPC6表达下调（P<0.05），其中越婢汤组TRPC5较固精方组下降明显，而固精方组TRPC6降低显著（P<0.05）。Nephrin、Synaptopodin、F-actin表达升高（P<0.05），足突融合减轻。RHoA、Rac1、Podocin则较模型组差异无统计学意义（P>0.05）。FSGS阶段，与模型组比较，固精方组尿蛋白排泄降低（P<0.05），越婢汤组蛋白尿下降但差异无统计学意义（P>0.05）。两组血清白蛋白升高，TRPC5、TRPC6、RHoA、Rac1表达下调，Synaptopodin表达升高（P<0.05），足突融合减轻。固精方组Nephrin、F-actin表达升高（P<0.05），两组Podocin与模型组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。.结论：越婢汤、固精方可分别通过调控TRPC5与TRPC6减轻足细胞损伤、治疗蛋白尿，TRP通道可能是调控玄府开阖的重要分子和汗法与补法的作用靶点，本研究为肾玄府理论提供了一定的分子生物学基础。