补肾化痰祛瘀方对多囊卵巢综合征CYP17基因转录因子调控的研究

高雄激素血症是多囊卵巢综合征（PCOS）的主要特征，由CYP17基因编码的P450c17是雄激素合成的关键酶。高胰岛素血症和高雄激素血症相互促进，形成恶性循环。PCOS胰岛素信号通路存在选择性缺陷，而其雄激素合成的信号通路处于亢进状态。这两者是否有关有关？如果是，那么又是如何诱导PCOS的高雄激素血症的产生？我们根据中医理论和临床实践筛选的补肾化痰祛瘀方可显著降低PCOS患者的高雄激素水平，促进排卵，有利妊娠。本课题拟用EMSA、RNA干扰技术和荧光素酶报告基因检测系统等技术，明确胰岛素对PCOS卵泡膜细胞CYP17基因表达的影响及可能的信号转导途径，探讨胰岛素对PCOS卵泡膜细胞CYP17基因调控转录因子的作用模式及补肾化痰祛瘀方对由胰岛素激活的CYP17基因表达的调控机制。

本项目在明确补肾化痰祛瘀方对多囊卵巢综合征治疗作用的基础上，进一步探讨其作用模式以及对基因转录的调控途径。研究结果表明：（1）PKC抑制剂可显著抑制胰岛素协同Forskolin对CYP17基因表达的刺激作用并可明显抑制Forskolin刺激雄烯二酮的合成，且具有浓度依赖性，说明胰岛素对CYP17基因表达的调控可能是通过PKC通路来实现的。（2）补肾化瘀祛痰方通过诱导芳香化酶的表达，促进雄激素的代谢，从而降低ASR模型大鼠血清T水平，纠正其紊乱的内分泌环境，改善卵巢功能，促进性周期的恢复。（3）中药单体复合物可能是通过调节3β-HSD 、CYP17基因及AR的表达来降低模型大鼠体内雄激素水平。（4）黄芩苷可能是通过抑制3β-HSD 、CYP17基因的表达抑制雄激素的合成，并上调CYP19的表达促进在雄激素转化为雌激素，从而降低其雄激素水平。黄芩苷对CYP17基因调控转录调节的作用位点，可能在-2017 bp和-1755 bp之间和-1249 bp和-1032 bp之间两个区域,在这两个区域中检测到Spl、C/EBPα、NF-1、GATA-1等重要调控元件。