瘦素调控Nmnat基因影响小胶质细胞活性的机制研究

脑梗塞病人的残疾多由神经元损伤或坏死所致，小胶质细胞、瘦素和Nmnat均具有神经元保护功能，不同活化程度的小胶质细胞，对神经元或发挥保护作用，或产生损伤效应。前期实验提示：瘦素与神经元修复以及脑梗塞病灶好转密切相关。最新研究发现，Nmnat基因的三种亚型Nmnat1、Nmnat2和Nmnat3，尤其是Nmnat2具有很好的神经保护作用。本实验目的在于明确这三种神经保护因素之间，时间和空间上是否相互关联。拟利用小胶质细胞为研究对象，采用实时定量RT-PCR技术首先明确瘦素是否调控Nmnat基因的表达，进而运用凝胶阻滞实验，鉴定Nmnat基因是否为STAT3或NFκB直接调控基因，并采用lacZ报告基因融合、DNA酶I足迹和引物延伸技术，深入研究STAT3或NFκB如何直接调控Nmnat基因的转录，最终将表型和分子实验数据结合起来，认识瘦素如何通过对Nmnat基因的调控，参与脑梗塞病灶的修复。

本研究的目的在于探讨瘦素的保护脑缺血再灌注损伤能量恢复机制。再灌注后我们检测神经功能学评分，脑水肿和梗死灶体积，监测脑组织病理学改变和糖摄取状况并且检测脑组织中LDH，乳酸，丙酮酸和ATP的水平。检测血清中瘦素水平。为了进一步研究瘦素诱导的神经保护通路，我们检测了脑组织和细胞内p-Akt的水平。短暂性缺血后，瘦素处理能够显著降低神经功能学评分，梗死灶体积和脑水肿。同时ATP，瘦素和p-Akt水平显著增加，LDH和乳酸/丙酮酸比值下降，并且圣经损伤显著改善。但是给予PI3K通路抑制剂LY294002后，这些指标都会被逆转。这些数据说明了瘦素改善脑缺血再灌注损伤通过增加p-Akt从而增加能量供给。PI3K/Akt是瘦素介导的神经保护作用的主要通路，或许有利于脑缺血中风的治疗。