Notch信号通路在涎腺腺样囊性癌侵袭转移中作用及机制的研究

涎腺腺样囊性癌(SACC)因早期浸润和血行转移故治疗困难。Notch信号通路影响多种器官发育和功能，且与肿瘤发生发展密切相关。多种肿瘤都发现Notch信号通路异常活化，活化后Notch通路可抑制细胞分化，抵抗细胞凋亡，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭转移能力以及肿瘤组织的血管生成。本课题组前期研究发现在SACC中多个Notch信号通路相关分子表达失调，其中Notch4基因在转移及复发的SACC组织中高表达，通过siRNA下调Notch4基因表达后，SACC细胞的体外侵袭能力明显下降。本课题拟在此基础上用基因过表达技术、RNA干扰技术研究Notch受体对多个SACC细胞株增殖、体外侵袭能力的影响，结合第二代DNA测序技术，系统研究SACC细胞中Notch信号通路活化机制，寻找合适的基因治疗靶点，并采用动物模型分析Notch通路关键分子作为SACC基因治疗靶点可能性，为SACC抗转移治疗奠定实验基础。

背景与目的：涎腺腺样囊性癌（SACC）是头颈部的常见恶性肿瘤，通过血行转移至肺是其临床生物学特征之一，治疗及预防肺部转移是该病治疗的难点，也是其愈后不良的主要原因。很多研究显示Notch信号通路在癌症的发生发展中可能起着抑癌或促癌的作用。本研究目的在于阐明Notch信号通路的重要分子在SACC发生发展中的作用及其可能的分子机制，为寻找新的治疗靶点奠定实验基础。.方法：利用免疫组化分析基因在SACC临床样本中的表达变化，并结合相应的生物信息学分析相应基因在相关肿瘤中的可能作用；采用过表达技术和RNA干扰技术，分析相关基因对SACC细胞增殖能力、迁移和侵袭能力、细胞凋亡及裸鼠体内成瘤能力的影响；采用第二代转录组测序和染色质免疫沉淀寻找Notch信号通路的下游基因，采用定量PCR和免疫印迹技术分析基因表达的变化。.结果：研究发现Notch1在SACC中表达明显升高，而且在转移和复发的样本中的表达高于没有转移复发的样本。Notch1可以促进SACC细胞增殖、迁移和侵袭能力，RNA干扰Notch1的表达可以明显抑制SACC细胞的成瘤能力并促进细胞凋亡。在SACC临床样本中Notch2的表达明显高于癌旁组织，RNA干扰Notch2的表达可以抑制SACC细胞的增殖能力及迁移、侵袭能力。FZD2基因在转移和复发的SACC样本中的表达明显低于没有转移复发的样本，而且FZD2基因可以抑制SACC细胞的增殖、迁移和侵袭。Notch1过表达和RNA干扰以后进行的转录组测序发现了多个Notch信号通路的下游基因，其中Hes1、Hey1表达量下调后细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱。多个Notch信号通路的抑制剂可以明显抑制SACC细胞的增殖。.结论：首次明确了Notch-1和Notch-2基因在SACC发生发展中促进作用，明确了FZD2对SACC发生发展的抑制作用，同时阐明了Notch信号通路下游基因在SACC中的生物学功能，为SACC的基因治疗提供了可能的靶点。