从NOBOX转录因子对原始卵泡激活及发育的调控途径研究补肾健脾方改善老龄小鼠卵巢低反应的机制

Poor ovarian resonse(POR) determines the result of IVF, which has been the bottleneck problem. The birth demand of older women and the beginning of the second child policy will lead to the rising incidence of POR. Activating the primordial follicle can improve POR. Our research group’s preliminary study has certified BuShenJianPi Formular effectively improve the antral follicle account and the level of GDF-9 and BMP-15 in follicles. Integrating the new understanding of activating primordial follicle, especially, Nobox transcription factor can regulate and control the activating of primordial follicle through the direct(Nobox can activate primordial follicle directively) and indirect way(GDF-9 and BMP-15 regulate the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway),we propose the hypothesis” BuShenJianPi Formula can improve POR through the changges of the key proteins in Nobox pathway for activating the primordial follicle”. First,we plan to observe the changes of key proteins in Nobox pathway in the process of BuShenJianPi Formular improving the POR of naturally aging mice; secondly, observe the changes of key protein in Nobox pathway in the process of primordial follicle activating in vitro treated by BuShenJianPi Formula drug serum. We expect to clarify the mechanism of BuShenJianPi Formula to improve POR, to provide the basis for advanced research in the future.

卵巢低反应（POR）是IVF失败的关键因素，已成为生殖医学的瓶颈。大龄婚育增加，二胎的开放，将导致POR发生率激增。激活原始卵泡是有效改善POR的途径之一。课题组前期研究证实，补肾健脾方能有效提高大龄POR女性窦卵泡数量及卵泡中GDF-9、BMP-15的表达而改善POR。结合对原始卵泡激活调控的新近认识，尤其是Nobox可通过直接途径（Nobox直接激活原始卵泡发育）和间接途径（GDF-9和BMP-15调控PI3K/Akt/mTOR信号通路）调控原始卵泡激活，我们提出“补肾健脾方改善POR是通过Nobox激活原始卵泡发育的调控途径实现的”的假说。拟通过首先观察补肾健脾方对改善自然衰老小鼠POR过程中Nobox途径关键蛋白的影响；进一步观察补肾健脾方含药血清对体外原始卵泡激活过程中Nobox直接和间接途径关键蛋白的表达，预期阐明补肾健脾方改善POR的机制，为进一步研发补肾健脾方提供研究基础。

卵巢低反应(POR)是IVF失败的关键因素,已成为生殖医学的瓶颈。大龄婚育增加,二胎的开放,将导致POR发生率激增。激活原始卵泡是有效改善POR的途径之一。课题组通过体内实验观察补肾健脾方对自然衰老小鼠卵巢反应性的作用，并通过观察改善自然衰老小鼠POR过程中Nobox途径等关键基因及蛋白的变化;同时通过体外实验进一步观察补肾健脾方含药血清对体外原始卵泡激活过程中Nobox直接和间接途径关键蛋白的表达,预期阐明补肾健脾方改善POR的机制。本研究结果发现：（1）中药补肾健脾方可改善老龄小鼠的卵巢功能。研究发现补肾健脾（高剂量）组小鼠的发情周期中发情前期和发情期的比例及产仔数量均较老年对照组有增高趋势；同时发现补肾健脾（高剂量）组小鼠血清AMH水平较其他老龄小鼠增高（P<0.05）。（2）中药补肾健脾方有助于提高老龄小鼠促排卵中卵巢反应性及卵子和胚胎质量；本研究中发现补肾健脾（高剂量）组小鼠在COS和IVF中获卵数，MII卵子数，受精卵数及形成的囊胚数量均较老年对照组增多，且有统计学差异（P<0.05）。3）中药补肾健脾方有助于提高老龄小鼠卵泡发育效率；研究中发现卵泡计数结果显示补肾健脾（高剂量）组小鼠卵巢中原始卵泡，初级卵泡，次级卵泡及窦卵泡的数量较老年对照组小鼠增高，且有统计学差异（P<0.05）。4）中药补肾健脾方改善老龄小鼠卵巢反应性的作用机制可能与转录因子NOBOX的表达上调相关。补肾健脾（高剂量）组小鼠卵巢中Nobox基因表达较老年对照组增多，且有统计学差异（P<0.05）。同时通过免疫荧光染色结果观察发现：补肾健脾（高剂量）及补肾健脾（低剂量）组卵巢中NOBOX蛋白表达较老年对照组增加，有统计学差异（P＜0.05)。该结果提示中药补肾健脾方改善老龄小鼠POR的机制与上调小鼠卵巢中NOBOX转录因子的表达密切相关。