CaSR介导PI3K/Akt/mTOR信号通路在子宫内膜异位症细胞凋亡中的机制研究及中药干预作用

Endometriosis (EMs) causes chronic pelvic pain, dysmenorrhea, infertility ,which bring great pain to patients ,so far the pathogenesis of it is unclear. Accumulated evidences suggest that abnormal expression of some genes contribute to the establishment and maintenance of the disease. Calcium sensing receptor (CaSR) is a G (transmembrane conductance) protein coupled receptor, and participate in the regulation of cell differentiation and apoptosis . In the previous experiments, we found that the low level of calcium dependent protease (CAPN5) could induce the apoptosis of EMs cells , therefore, we hypothesized that CaSR has abnormal expression in endometriosis and induces the inhibition of classical anti apoptotic PI3K/Akt/mTOR signaling pathway . To this end, this project intends to establish EMs cell culture model in vitro and xenograft nude mice model, using CaSR agonists、TanⅡA and key protein inhibitors of PI3K/Akt/mTOR signal pathway,from two sides and three levels including organization, cellular and molecular,to observe the mechanisms of both CaSR and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in the apoptosis of endometriosis and the effect of using TanⅡA. To improve the theoretical basis for the pathogenesis of endometriosis, and to develop new ideas for its prevention and treatment.

子宫内膜异位症（EMs）导致慢性盆腔痛、痛经、不孕给患者带来极大痛苦，其发病机制尚未阐明，目前多认为与内膜细胞异常表达调控相关。钙敏感受体（CaSR）是G（跨膜传导）蛋白偶联受体，参与调节细胞分化、凋亡。在前期实验中我们发现钙依赖蛋白酶（CAPN5）低水平表达可以诱导EMs内膜细胞的低凋亡率，所以我们推测CaSR在子宫内膜异位症中存在异常表达并诱导经典抗凋亡PI3K/Akt/mTOR信号通路启动导致细胞凋亡抑制。为此，本项目拟建立EMs体外细胞培养模型和异体移植裸鼠模型，应用CaSR激动剂、丹参酮IIA、PI3K/Akt/mTOR通路各关键蛋白抑制剂，从正反两方面，结合组织-细胞-分子三个层次，系统观察CaSR及PI3K/Akt/mTOR信号通路在子宫内膜异位症细胞凋亡中的作用机制及活血化瘀中药（丹参）的作用靶点，为EMs的发病机制完善理论基础，为其防治拓展新思路。

子宫内膜异位症（EMs）导致慢性盆腔痛、痛经、不孕给患者带来极大痛苦，其发病机制尚未阐明，目前多认为与内膜细胞异常表达调控相关，内膜细胞的低凋亡率使得内膜组织更容易粘附，侵袭而生长。本项目同时建立EMs体外细胞培养模型和人源性异体移植裸鼠模型，结合组织-细胞-分子三个层次立体化对EMs发病机制研究。首先，通过免疫组化、免疫荧光技术、PCR检测及蛋白检测的表达，CaSR在子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜的表达的确存在异常增加，那么CaSR的过度表达一定与内异症的发病相关。在体外内膜细胞培养模型中，通过凋亡检测、PCR技术和WB技术，证实在位和异位的内膜细胞信号通路PI3K/p-Akt/mTOR的高水平表达，抗凋亡因子Bcl-2表达上升，凋亡蛋白Caspase3、Bax表达下降，与降低的凋亡率完全相符，进一步解析子宫内膜异位症的发病机制。其次，在人子宫内膜异位症裸鼠模型中，应用CaSR激动剂、mTOR抑制剂、丹参酮IIA干预、TUNEL法、PCR技术和WB等技术，证明CaSR可以启动信号通路PI3K/Akt/mTOR，是其上游的启动因子，而凋亡相关的蛋白能够收到上游信号通路的调节，从而使得凋亡率异常变化，同时，丹参酮IIA显示出了良好的促进细胞凋亡趋势，对PI3K/Akt/mTOR信号通路具有明确的抑制作用的表达，促进凋亡因子表达，对研究丹参治疗子宫内膜异位症有重要意义，可能通过促进细胞凋亡，抑制种植灶的生长而达到治疗子宫内膜异位症的潜在作用机制，本项研究的完成为EMs的发病机制完善理论基础，为中药治疗EMs提供思路和理论支撑。