MSC诱导CD34+HPC分化形成调节性DC的应用与机制研究

复合组织移植是治疗严重面部毁损伤的理想方案，而高强度免疫抑制药物治疗却可能带来巨大毒副作用。骨髓间充质干细胞（MSC）有负向免疫调节作用，可调控树突状细胞(DC)的分化，但其作用机制仍不明了。在上一项国科金资助下，我们证实MSC可在体外诱导CD34+造血祖细胞分化为具有体外免疫抑制作用的成熟、稳定的DC：MSC-DC；并推断MSC可能经Notch通路诱导DC分化。因此，本研究提出假说：MSC-DC可在体内作为调节性DC介导移植免疫耐受，而Notch通路在MSC的免疫调节机制中起重要作用。本课题拟在体外对MSC-DC作进一步鉴定；并以大鼠血管化皮肤移植模型，着重研究供体来源MSC-DC是否可作为调节性DC介导移植免疫耐受；并引入荧光蛋白转基因小鼠，检测MSC-DC在受体内性质是否保持稳定；最后对Notch通路在MSC诱导DC分化中的作用进行初步探讨。本研究有助于为移植免疫耐受诱导提供新途径。

本项目实施早期基本按课题申请时计划进行，项目实施中期根据国际上的最新研究进展以及课题中遇到的具体困难，进行了适当调整。.目前国际上异体复合组织移植研究进展迅速，手移植已开展近百例，颜面移植也已开展近十例，积累了大量的临床经验。啮齿动物模型实验中获得的经验，往往难以应用于临床。为了获得更接近临床应用的实验结果，我们决定在本项目中改用大动物模型代替原定的大鼠动物模型。目前，异体复合组织（手及颜面）移植在儿童尚未有开展先例。复合组织移植是潜在的先天性颅面严重畸形以及先天性手畸形的治疗方案。与成人相比，儿童尤其是婴儿的免疫系统特点，主要免疫抑制剂药理学，毒理学特点均有所不同。为了在这一领域获得突破，我们决定以幼猪作为动物模型开展工作。确立动物模型后，在项目实施初期，我们严格按照国科金申请标书的思路开展工作，成功完成了猪MSC的培养和鉴定以及猪复合组织模型的建立。然而，在项目实施中期，由于无法获得抗猪CD34表面分子抗体，使我们无法进行猪CD34+造血干细胞鉴别和分离，因此无法继续按原定思路开展实验。课题组在经过谨慎讨论之后，决定结合本课题组既往的工作基础，进行造血干细胞混合嵌合体诱导新生猪异体复合组织移植免疫耐受工作。.目前，本课题已经成功完成的实验包括：（1）完成了大鼠未成熟树突状细胞诱导复合组织移植皮瓣免疫耐受研究；（2）完成了猪骨髓间充质干细胞（MSC）的分离、培养；（3）完成了新生猪后肢复合组织移植模型的构建；（4）对猪CD34+HPC进行了初步检测；（5）完成了新生猪环孢素A的药理学实验研究，为进一步的移植实验提供了合理用药指导；（6）完成了新生猪T细胞，B细胞，NK细胞，调节性T细胞的鉴别分析；（7）完成了兔抗猪胸腺细胞免疫球蛋白（ATG）在新生猪体内实验研究，为供体造血干细胞移植的诱导治疗提供了支持。.本课题已发表SCI论文2篇，另外正在投稿SCI论文1篇，正在撰写英文论文1篇。我们计划在今后两年中，继续推进并完成这一项工作。另外，我们仍在密切关注抗猪CD34表面分子抗体的研究进展。如将来获得此抗体，我们可按照国科金申请标书思路，进行MSC诱导CD34+HPC分化形成调节性MSC-DC的研究工作。