云南省主要流行的7型庚型肝炎病毒对HIV-1的增殖抑制作用及其分子机制研究

GB Virus C/Hepatitis G Virus (GBV-C/HGV) is a positive stranded RNA virus. GBV-C infection has not been associated with any disease. However, several studies found that persistent GBV-C infection inhibited the HIV proliferation, improved the immunity system and survival ability in HIV-positive individuals. In fact, GBV-C has been considered as a potential anti-HIV agent. The genotype diversity of GBV-C contributes to its inhibitory effect on HIV. In addition, Target protein that directly associated with GBV-C was rarely reported. Thus, it is critical to deeply investigate the mechanisms of the inhibitory effects of GBV-C on HIV. We used the new GBV-C genotype 7 virus in Yunnan to perform the current study. We found that the GBV-C genotype 7 virus had significant effect on the inhibition of HIV proliferation. Based on the preliminary results, we'll use the functional protein that the genotype 7 virus encoded and the effective system for detecting protein-protein interaction to screen and identify the target proteins of HIV-1 and the host. Furthermore, we'll study the mechanism of the GBV-C anti-HIV based on the biological function of the target proteins. Our study can help to provide direct evidences to better understand the functional mechanism between GBV-C and HIV, and may provide a new insight into HIV prevention and treatment.

庚型肝炎病毒（GBV-C）是一种单股正链RNA病毒，该病毒本身无致病性，但可抑制HIV增殖、提高机体免疫、延缓HIV患者疾病进程，被誉为"潜在的HIV治疗剂"。不同GBV-C基因型对HIV的抑制效应具有差异，且目前少有报道与GBV-C直接作用的靶蛋白。因此，深入探讨GBV-C抑制HIV的作用机理是一个函待解决的关键科学问题。本研究基于课题组新发现的云南主要流行株GBV-C 7型毒株，通过7型GBV-C临床分离株与HIV-1共感染细胞，初步确定该毒株对HIV-1具有明显增殖抑制作用，进而拟通过7型GBV-C编码的功能蛋白，利用蛋白互作研究体系，从病毒和宿主两个层面出发，确定出与7型GBV-C功能蛋白直接作用的HIV-1靶蛋白和宿主靶蛋白，结合靶蛋白的生物学功能研究7型GBV-C抑制HIV-1的机制。本项目将为全面了解GBV-C与HIV间作用机制提供直接证据，并为预防和治疗HIV奠定理论基础。

GBV-C无致病性，但与HIV共感染可以延缓HIV患者的疾病进程，主要表现为降低HIV患者的病毒载量、提高HIV患者的CD4+细胞数、延长HIV患者的寿命。确定病毒与病毒或与共用宿主间直接作用的蛋白及其功能是研究两病毒间相互作用机理的关键环节。为了探究GBV-C抑制HIV增殖的分子作用机制，本项目利用云南主要流行7型GBV-C临床分离株和HIV细胞培养株，通过蛋白互作筛选及互作蛋白对HIV复制影响的研究，从HIV和宿主两个层面，分别研究与GBV-C功能蛋白直接作用的靶蛋白，并深入探讨其抑制HIV的作用机理。通过本项目的研究，首先，在细胞水平确定了7型GBV-C对HIV具有增殖抑制作用，并筛选出GBV-C编码的E2和NS5A蛋白具有体外抑制HIV增殖的活性。然后，利用酵母双杂交技术、Co-IP、激光共聚焦等技术筛选出GBV-C E2蛋白可以与宿主LT-a蛋白互作，GBV-C E2蛋白可与HIV编码的整合酶蛋白P10互作。最后，利用qPCR和WB技术，初步揭示了GBV-C与宿主蛋白LT-a结合可降低宿主细胞中LT-a蛋白的表达进而抑制了HIV的复制,GBV-C E2蛋白与HIV的P10互作降低了HIV的蛋白酶活性进行抑制了HIV的复制。该结果为进一步阐明GBV-C抑制HIV的增殖机制研究提供了重要科学依据, 并为GBV-C作为生物治疗剂应用于HIV的治疗提供了重要理论支撑。