不同H-FABP基因型乌金猪肌内脂肪沉积分子机制的研究

心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）是目前认识的最重要的猪肌内脂肪沉积侯选基因，但不同H-FABP基因型猪肌内脂肪沉积存在差异的分子机制尚不清楚。乌金猪是云南地方猪种，具有肌内脂肪含量高，肉质细嫩等优良性状，是制作云南宣威火腿的原料。本课题组在前期工作中，发现不同H-FABP基因型乌金猪肌肉组织中脂肪合成代谢相关因子表达水平与肌内脂肪含量显著相关。但由于肌内脂肪主要来源于肌内脂肪细胞，其含量是细胞中脂类代谢合成与分解间的动态平衡结果。因此，在前期工作基础上，本项目拟立足于肌内脂肪细胞，测定细胞中甘油三酯含量，围绕脂类代谢，从转录和蛋白质水平检测相关因子的表达水平，分析表达水平和甘油三酯含量的相关性，绘制显著相关因子调控网络示意图，旨在阐明不同H-FABP基因型乌金猪肌内脂肪沉积的分子机制，为H-FABP作为标记基因，辅助育种，提高肌内脂肪含量，改善肉品质，提供理论指导和科学依据。

肌内脂肪含量是影响肉品质的重要指标之一。心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）是目前认识的最重要的猪肌内脂肪沉积侯选基因，但不同H-FABP基因型猪肌内脂肪沉积存在差异的分子机制尚不清楚。乌金猪是云南地方猪种，具有肌内脂肪含量高，肉质细嫩等优良性状，是制作云南宣威火腿的原料。肌内脂肪主要来源于肌内脂肪细胞，其含量是细胞中脂类代谢合成与分解间的动态平衡结果。本研究通过油红O染色观察了不同H-FABP基因型乌金猪肌内前脂肪细胞中脂滴数量，采用试剂盒检测方法测定了肌内脂肪细胞甘油三酯含量，发现HH 或 dd基因型乌金猪肌内脂肪细胞中脂滴数量和甘油三酯含量明显高于其它基因型。利用实时荧光定量PCR方法和Western blotting技术，检测不同H-FABP基因型乌金猪肌内脂肪细胞中脂类代谢和脂滴形成相关基因的mRNA和蛋白表达水平，结果表明，不同H-FABP基因型乌金猪肌内前脂肪细胞中脂肪合成代谢酶，如乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶系（FAS）、固醇类元件结合蛋白1（SREBP-1c）、二酰甘油转酰基酶 （DGAT-1）、脱饱和脂肪酸酶（SCD）、脂肪酸转运蛋白如H-FABP、脂肪型脂肪酸结合蛋白（A-FABP）、脂肪分解代谢相关酶类如激素敏感脂肪酶（HSL）、脂蛋白脂解酶（LPL）、肉碱脂酰基转移酶1B（CPT-1B）以及脂滴形成相关基因如脂滴特异蛋白27（FSP27）、脂滴包被蛋白2（PLIN2）、脂肪肥胖相关蛋白（FTO）表达的mRNA或蛋白水平存在着差异，表现为肌内脂肪含量比较高的HH 或dd基因型，其脂肪合成代谢相关基因、脂肪分解代谢相关基因以及脂滴形成相关基因的mRNA或蛋白表达水平均高于其它基因型。不同H-FABP基因型乌金猪肌内脂肪细胞中甘油三酯含量与基因表达水平的关联分析结果显示，脂肪合成代谢相关基因、脂肪分解相关基因以及脂滴形成相关基因的表达水平与甘油三酯含量存在着相关性。总之，本项目立足于肌内脂肪细胞，测定了细胞中甘油三酯含量，围绕脂类代谢，从转录和蛋白质水平检测了相关因子的表达水平，分析了脂类代谢相关基因表达水平和甘油三酯含量的相关性，绘制了显著相关因子调控网络示意图，阐明了不同H-FABP基因型乌金猪肌内脂肪沉积的分子机制，为H-FABP作为标记基因，辅助育种，提高肌内脂肪含量，改善肉品质，提供理论指导和科学依据。