沙眼衣原体检测血清学标志物的优选与验证

Urogenital Chlamydia trachomatis(Ct) infection has been the top sexually transmitted disease in the world and China.Its complications are various and serious. Ct infection increased dramatically. The reason is lots of infected person are asymptimatic and become important reservoirs and source of infection. There is no effective vaccine for Ct infection until now. Experience from Europe shows Ct screening and treating are very useful for Ct control. But all the reagents used in our country are unsuitable for Ct screening owing to low sensitivity or unobjective result judgement. Basing on previous work and ELISA technique and highly expression of target antigens, I aim to re-choose and optimize the serological markers of Ct infection. By comparing with golden standard, a optimal markers'combination will be determined. The stability and value of the method will be evaluated by detecting Ct infection in a large population. The main advantage of this method is recombinant protein uasge which prevents protein pollution. This method may decrease the detection cost, keep the specificity and increase the sensitivity obviously. So the method will be very suitable for Ct detection and screening. Our research may lay a experimental foundation for improving Ct detection method and developing a Ct screening reagent in our country. It makes sense in promoting Ct screening and controling Ct infection in China.

泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct）感染已居于全球和我国性病首位，并发症多且严重。其感染在全球迅速增长的根源是大量感染者没有症状，成为重要储主和传染源。至今尚无有效的疫苗。欧洲发达国家经验显示开展Ct筛查并及时治疗是控制传播的有效途径，然而我国现有的检测方法由于敏感性偏低或结果判读不客观等原因均不适用于筛查。本课题在前期基础上,高效表达候选蛋白，应用酶联免疫吸附技术，对Ct感染的血清标志物进行重新选择和优化，通过对照金标准，确定具有最高敏感性和特异性的标志物组合，充分提高检测准确性。将建立的方法进一步扩大规模应用，观察其稳定性，初步评价应用价值。本研究采用重组抗原解决了抗原来源困难和污染的问题，成本低廉，在检测中以2-4种标志物为组合抗原，保证检测特异性不低于现有方法而敏感性显著提高，更好满足Ct筛查的需要。本研究能够为改进我国Ct检测方法和开发筛查试剂奠定实验基础，对Ct感染的疾控具有积极作用。

泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct）感染已居于全球和我国性病首位，并发症多且严重。其感染迅速增长的根源是存在大量没有症状的潜伏感染者。欧洲发达国家经验显示开展Ct筛查并及时治疗是控制传播的有效途径，然而我国现有的检测方法由于敏感性偏低或结果判读不客观等原因均不适用于筛查。为了寻找适合开展Ct筛查的更为敏感和特异的候选蛋白，本课题在前期基础上, 选择5个抗原性最强的蛋白（CPAF、OmcBc、CT841、CT143、CT101）保证检测的高敏感性，同时选择兼具较强抗原性和特异性的5个目标蛋白（pgp3、TARP、CT813、IncA和CT875），以保证检测的高特异性，同时选择沙眼衣原体主外膜蛋白（MOMP）和热休克蛋白60（Hsp-60）作为对照抗原。收集100名性病门诊经直接免疫荧光法诊断的泌尿生殖道沙眼衣原体感染患者的血清和50名性病门诊经直接免疫荧光法除外了沙眼衣原体感染者的血清，用于微量免疫荧光和ELISA检测，同时收集该100名感染有衣原体者的宫颈/尿道拭子用于衣原体培养。表达上述蛋白后，包被ELISA板，同时设阳性对照和阴性对照，对上述血清进行相应抗体的检测，同时以微量免疫荧光和衣原体培养两种“金标准”作为对照。最终选定Pgp3、CT694、CT875为优化血清标志物组合，与微量免疫荧光的阳性符合率达到98.78%。制备Pgp3、CT694、CT875三种蛋白的单克隆抗体。应用建立的方法，对300名15～40岁的非性病门诊性活跃人群进行血清沙眼衣原体抗体的筛查，并与微量免疫荧光法作对照，共筛出衣原体感染阳性者63例，沙眼衣原体感染总阳性率21%。63例ELISA法阳性结果血清中，62例微量免疫荧光法结果阳性，1例阴性。237例ELISA阴性结果血清中，234例微量免疫荧光结果阴性，3例阳性。以MIF法为标准，3种免疫优势蛋白组合筛选检测的敏感度为95.38%（62/62+3），特异度为99.57%（234/234+1）。本研究采用重组抗原解决了抗原来源困难和污染的问题，成本低廉，更好满足Ct筛查的需要。本研究为改进我国Ct检测方法和开发筛查试剂奠定了实验基础，对Ct感染的疾控具有积极作用。