猪细小病毒和乙型脑炎病毒二价重组苗的研究

将乙型脑炎病毒（JEV）的E蛋白基因插入到杆状病毒转移载体PAcUW31中的BamHⅠ位点，命名为pAcUW并且利用聚合酶链式反应从猪细小病毒（PPV）的基因组中扩增出了VP2基因片段，并将其克隆到pGEM-T载体中，将VP2片段插入到pAcUWJE中的BgCⅡ位点，构建了转移载体的重组质粒，命名为pAcUWJEPPV，将该质粒与经Bsu36Ⅰ线性化的杆状病毒AcMNPV·LacZDNA共转染昆虫细胞，利用X-gal和中性红双重染色技术进行蚀斑试验，挑选阳性重组病毒，并利用间接荧光抗体技术和核酸斑点杂交技术验证重组病毒的正确性，将重组病毒感染昆虫细胞，利用超声波裂解细胞后回收蛋白，并用免疫学技术纯化蛋白，与弗氏不完全佐剂混合后免疫猪只，结果能检到PPV和JEV的血凝抑制抗体。