基于自噬降解NLRP3炎症体探讨益肾降浊法抑制尿酸性肾病肾脏免疫炎性损伤的作用机制

The pathogenesis of hyperuricemic nephropathy is complicated，and the immune inflammatory injury is the key link. Our previous research shown that QLY can inhibit the renal immune inflammatory injuries and protect the renal function which might be achieved by regulating the NLRP3 inflammasome, but the mechanism is still unknown. Others’ research shown that the autophagy can down-regulated the NLRP3 inflammasome, and the mechanism might be that autophagy can degrade the component of NLRP3 inflammasome. Inference: Yishen Jiangzhuo therapy may induce and activate the autophagy to repress hyperuricemic renal impairment via degrading the NLRP3 inflammasome. On the basis of our finished work, in this study, focusing on the autophagy and the NLRP3 inflammasome, we will research in the the mechanism of the autophagy degrades the NLRP3 inflammasome in hyperuricemic nephropathy, and Qinlingye’s effects on the autophagy and related factors, thus to explore the mechanism and targets of Yishen Jiangzhuo therapy relieving the renal immune inflammatory injuries, and to provide scientific basis for the application of Yishen Jiangzhuo therapy in hyperuricemic nephropathy.

尿酸性肾病的发病机制繁复，免疫炎性损伤为其核心环节。前期研究表明以益肾降浊为法的秦苓液（QLY）可抑制尿酸性肾病肾脏免疫炎性损伤、保护肾功能，而该作用与调控免疫炎性关键信号通路--NLRP3炎症体相关，但具体机制尚不清楚。同行研究证实，自噬对NLRP3炎症体具有负调控作用，机制可能是直接降解NLRP3炎症体相关组分。由此推论：益肾降浊法可能通过调控自噬降解NLRP3炎症体抑制尿酸性肾病肾组织免疫炎性损伤。故本项目在原工作基础上，侧重从自噬及NLRP3炎症体的研究入手，采用体内外试验相结合的方式，在基因和蛋白质水平，探讨尿酸性肾病中自噬对NLRP3炎症的调控作用及机制，进一步观察以益肾降浊为法的QLY对自噬的影响，揭示益肾降浊法抑制尿酸性肾病的作用靶点及分子机制，为益肾降浊法在尿酸性肾病中的应用提供科学依据。

尿酸沉积引起的肾脏损害称为尿酸性肾病（UAN），其发病机制复杂，免疫炎性损伤为其核心环节。以益肾降浊为法的QL对UAN有明确的治疗作用，但其调控机制尚不清楚，既往研究认为可能与调控自噬降解NLRP3炎症体有关。为证明该假设，我们采用体内与体外实验相结合的方式，评估QL对自噬和NLRP3炎症体激活的影响。为更好的阐明QL的作用机制，我们还检测了QL在AMPK和Stat3磷酸化中的调控作用，以及自噬、AMPK/Stat3通路与NLRP3炎症小体之间的关系。结果显示，（1）体内实验：与正常组比较，模型组AMPK磷酸化水平、LC3表达及自噬体数量显著降低，Stat3磷酸化水平、P62、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-8、CD68表达以及24h蛋白尿、sCr、BUN、Sur水平显著升高，大鼠肾结构重度异常，肾小管扩张、尿酸盐沉积、肾小管上皮细胞坏死，肾小管间质大量炎症细胞浸润。与模型组比较，QL组AMPK磷酸化水平、LC3表达及自噬体数量显著升高，Stat3磷酸化水平、P62、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-8、CD68表达以及24h蛋白尿、sCr、BUN、Sur水平显著降低，肾脏病理表现减轻。与QL组比较，Compound C组AMPK磷酸化水平及LC3表达显著降低，Stat3磷酸化水平、P62、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-8表达以及24h蛋白尿、sCr、BUN、Sur水平显著升高，肾脏病理表现加重。（2）体外实验：与正常组比较，UA刺激后肾小管上皮细胞AMPK磷酸化水平、LC3表达及自噬体数量明显降低，Stat3磷酸化水平、P62、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 表达明显升高。与UA组比较，QL组AMPK磷酸化水平、LC3表达及自噬体数量明显升高，P62、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达明显降低。加入自噬抑制剂3-MA及AMPK抑制剂Compound C均可削弱QL对肾小管上皮细胞自噬及NLRP3炎症体相关因子表达的影响。由此证实，QL通过激活AMPK/Stat3通路促进自噬降解NLRP3炎症体从而改善UAN肾脏免疫炎性损伤。