抑制自噬-溶酶体通路对狼疮性肾炎状态下肾小管损伤及抗损伤能力的影响

Recently, several important guidelines for kidney disease treatment recommended that antimalarial, a inhibitor of autophagic-lysosomal pathway, should be administrated in patients with lupus nephritis (LN). However, our previous studies found that lysosomes were ruptured during tubular epithelial cell (TEC) injury induced by continuous excess proteinuria，while autophagy activation mounted an adaptive response in TECs after urinary protein overload. Therefore, we hypothesize that clinical application of antimalarial, through inhibiting autophagic-lysosomal pathway, may aggravate renal tubular injury and/or suppress the adaptive response during kidney injury in LN patients with heavier proteinuria. In the present study, since we have found that chloroquine could aggravate TECs injury induced by urine proteins, we firstly study whether chloroquine (an antimalarial) weakens the resistance of TEC to the stress and injury, as well as demonstrat whether corticosteroids counteract the action of chloroquine. Secondly, we investigate the effects of hydroxychloroquine on the injury and ability of resisting injury/stress during double setback of immune inflammation and urinary proteins in mice with LN and excess proteinuria. Also, whether corticosteroids counteract the actions of hydroxychloroquine is also investigated in LN mouse. Finallry, our hypothese will be further validated in LN patients with excess proteinuria.

近年来，几大权威肾病治疗指南均建议将具有联合抑制自噬活性和溶酶体功能的抗疟药作为狼疮性肾炎（LN）治疗的基础用药。但我们研究发现：蛋白尿在导致肾小管上皮细胞（TECs）损伤同时，其溶酶体膜受损且消化功能下降,而自噬活化则是TECs为减轻尿蛋白对自身损伤所起的一种保护性反应。因此我们推测，应用抗疟药抑制自噬-溶酶体通路可能会导致大量蛋白尿LN患者肾小管损伤或抗损伤能力下降。为验证上述假设，本项目拟在已发现自噬抑制可加剧尿蛋白对TECs损伤的基础上，首先采用体外研究探讨抗疟药是否会削弱TECs抗损伤能力，而联合应用皮质激素（溶酶体膜稳定剂和自噬促进剂）能否抵消上述效应；继之采用LN小鼠模型，探讨抗疟药对免疫炎症及蛋白尿双重因素所致肾小管损伤的影响，以及其对狼疮小鼠抵抗继发性急性肾损伤能力的影响，并进一步研究联合应用激素后，上述效应的变化；最后在临床LN患者上进一步验证上述假设。

鉴于几大权威肾脏病治疗指南均建议将羟氯喹作为狼疮性肾炎（LN）治疗的基础用药。但我们前期研究发现：自噬活化是肾小管上皮细胞（TECs）抵抗尿蛋白对自身损伤的一种保护性反应。因此我们提出假设：虽然羟氯喹一方面可通过免疫调节及抗炎机制等减轻狼疮所致的肾损伤，但羟氯喹可能同时作为自噬和溶酶体功能抑制剂而加剧大量蛋白尿LN患者肾小管损伤或（和）削弱肾小管的抗损伤能力。因此，本项目通过体外研究、动物实验和临床试验验证上述课题假设，旨在明确羟氯喹能否用于大量蛋白尿LN患者的治疗。.现已按计划完成绝大部分研究计划。首先体外研究发现，羟氯喹预处理可削弱尿蛋白超负荷TECs抵抗肾损伤因素（顺铂及缺氧）的能力，其机制可能与抑制自噬-溶酶体通路相关。接着动物实验发现，羟氯喹治疗对于大量蛋白尿LN小鼠是一把双刃剑：一方面，在普通情况下，羟氯喹可通过抑制狼疮原发病因所致的免疫炎症反应而对LN小鼠整体病情和肾脏均起明确的保护作用，未见其额外加剧肾小管损伤作用；然而，在LN小鼠面临肾损伤因素情况下（顺铂、肾缺血），羟氯喹则可削弱LN小鼠肾脏抵抗肾损伤因素所致的急性肾损伤（AKI）的能力，而其中机制之一是羟氯喹加剧了TECs细胞衰老，更多、更深层的机制仍在研究之中。最后，评估在狼疮肾炎NIH标准治疗方案的基础上加用羟氯喹对大量蛋白尿LN患者肾小管功能的影响，由于通过预试验后所算出的病例数远大于当时标书所设计的每组约30例（现恰好总入组60例），尚未完成全部入组计划，现获得初步的结果是在NIH标准方案的基础上，加用羟氯喹并未明确影响LN患者的基本病情，但是否加剧肾小管的损伤或降低其抵抗力未获结论。.以上结果提示，羟氯喹治疗对于大量蛋白尿LN的治疗是一把双刃剑，一方面通过抗炎、调节免疫机制保护肾脏，另一方面通过阻滞自噬-溶酶体通路、促进细胞衰老等机制而削弱肾小管抵抗AKI损伤的能力。