β2-微球蛋白在马立克氏病毒致病与致肿瘤中的作用

β2-微球蛋白（β2-M）是MHC-I类分子的β链，在肿瘤免疫中有着十分重要的作用。本课题组在蛋白质组学研究中发现了感染马立克氏病毒（MDV）强毒鸡羽囊细胞中β2-M显著升高。为深入了解β2-M 在MDV致肿瘤中的生物学功能，本课题通过测定β2-M在MDV肿瘤发展中的免疫学调节作用和可能的促细胞生长功能，确定β2-M信号传导分子机制和下游信号通路的特点，从而探索β2-M作为肿瘤治疗新靶位的可能性，为了解MDV感染过程病毒与宿主的相互作用，为人类癌症控制和MD的有效防治提供理论依据，有十分重要的理论意义。

β2-微球蛋白（β2M）是主要相容性复合体（MHC)I类分子的恒定链(轻链)，对MHC-I类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。在人类一些肿瘤中，β2M与肿瘤的生存、侵袭、凋亡，甚至转移有关。马立克氏病毒（MDV）是鸡的一种高度致肿瘤性病毒，作为研究癌症的模型有其重要意义。.本项目应用荧光定量PCR技术对chβ2m、MHC-I和Meq在MDV感染不同细胞中基因表达水平进行了检测。研究结果表明，chβ2m与MHC-I在MDV感染不同细胞中呈波动式变化，与MHC-I相比，chβ2m在感染前期出现异常表达上调，提示chβ2M在MDV感染过程中具有潜在的功能。 .应用RT-PCR从正常免疫鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增chβ2m 基因，将其克隆到原核表达载体，经表达，纯化获得大量可溶性chβ2m融合蛋白。利用chβ2m中的29个肽段免疫小鼠，通过杂交瘤技术筛选出五株抗chβ2M 的mAb，流式细胞术表明3D1可以与MSB1细胞中天然的chβ2M反应；免疫组化分析发现，在胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官均能表达chb2m，但不同区域细胞的表达水平具有差异性。.在正常培养的MSB1细胞中加入不同浓度chβ2m抗体后利用CCK-8法检测细胞生长活力，然后通过Annexin V/PI流式细胞术、DNA ladder和DAPI核染色观察chβ2m抗体对MSB1细胞的凋亡情况，并利用Real-time PCR检测凋亡相关信号分子caspase-3、8、9的表达。结果显示，抗chβ2m抗体对MSB1细胞生长活力有抑制作用；流式细胞术分析发现，抗chβ2m抗体可明显引起MSB1细胞的凋亡，并进一步证明抗体阻断chβ2M后可通过caspase-9和caspase-3的高表达引起MDV肿瘤细胞MSB1的凋亡。.通过MDV感染CEF细胞后利用脂质体转染的方法将不同浓度pcDNA3.1-chβ2m和pcDNA3.1分别转染CEF细胞，在不同时间点应用Real-time PCR检测不同转染组细胞内gB、meq以及chβ2m的基因表达水平。结果表明，MDV在体外过表达chβ2m 的CEF细胞中复制能力相应上调，可为chβ2m在MDV-宿主相互作用关系中的作用研究提供理论价值。