基于层次分析法和药动学-药效学结合模型探讨黄芩清肺汤有效部位治疗上呼吸道感染的物质基础

中药复方是中医临床用药的主要形式，然而长期以来，对方剂发挥临床疗效实质的解释多以中医药理论来解释，未能从微观层次上说明其作用的物质基础，这严重阻碍了中药现代化与国际化的进程。因此探讨中药复方药效物质基础，是当今学术界瞩目的焦点问题。本项目拟以疗效确切、用药安全的简单中药复方黄芩清肺汤的有效部位灌胃给药后在大鼠体内的动态血清药物化学研究为主线，采用HPLC-ELSD指纹图谱技术，在完成体内效应物质确证的基础上，结合建立的多成分同时定量分析方法和整体药效评价体系，同步开展多成分的PK、PD研究。进一步运用层次分析法评价药物的综合药效，以综合药效量化值构建适合于多成分体内PK过程分析及PK-PD结合研究的体系，获得能体现整体疗效的PK及PD参数，从而明确该方中有效成分的种类及主次地位、有效成分之间的相互作用及作用规律，为临床用药优化提供实验依据，为中药复方的现代研究提供新的思路与方法。

1、明确AHP在中药复方PK-PD结合研究中的应用价值. 建立动物模型（解热、抗菌和抗病毒），一定剂量黄芩清肺汤有效部位给药后血浆的黄芩苷、栀子苷和黄芩素的浓度-时间变化过程（PK），由一定药物浓度引起的效应变化（△T和TNF-α，PD），初步建立了黄芩清肺汤有效部位综合药效的PK-PD 评价模型，明确了黄芩总黄酮和栀子总环烯醚萜是主要药效成分，黄芩苷、栀子苷和黄芩素是其中主要成分，为临床用药优化提供实验依据，为中药复方的现代研究提供新的思路与方法。.2、优化了黄芩总黄酮的超声提取工艺 . 选取影响黄芩总黄酮提取率的主要因素，即提取时间、提取温度、乙醇浓度、液固比，进行四因素三水平中心组合实验，应用响应面分析法优化黄芩总黄酮的提取工艺参数。建立多元二次多项式回归模型，通过等高线和响应曲面分析各因素对响应值的影响以及各因素交互作用对总黄酮提取的影响强弱。并对最佳工艺条件验证。该工艺优于正交试验优化得到的提取工艺。.3、明确了黄芩总黄酮和栀子总环烯醚萜对含药小鼠血清体外抗病毒作用. 采用细胞病变法测定黄芩总黄酮、栀子总环烯醚萜苷及其组合物含药血清对人肺腺癌细胞(A549) 的最大无毒浓度和H1N1对A549细胞的半数组织感染量；采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测黄芩总黄酮、栀子总环烯苷及其组合物含药血清对H1N1的体外抑制作用和直接杀灭作用。黄芩总黄酮和栀子总环烯醚萜苷组合物具有明显的抗病毒效应，其作用机制可能是抑制病毒在细胞内的增殖和对病毒的直接杀灭作用。.4、明确了黄芩苷和栀子苷对内毒素致发热大鼠的影响研究. 测定黄芩苷、栀子苷的含量随时间的血药浓度的变化，采用LPS炎性发热模型测定黄芩苷、栀子苷浓度变化，并分析模型的体温变化和TNF-α含量变化，黄芩苷的解热效果明显。.5、申报了两种黄芩清肺汤有效部位治疗上呼吸道感染制剂的发明专利. 以黄芩清肺汤有效部位为基础，研制了相应的中药分散片和中药含片，测试了对甲型或乙型流感病毒感染小鼠的保护作用、对甲型或乙型流感病毒感染小鼠肺指数的影响、对系列细菌的体外抑制作用、对金黄色葡萄球菌或肺炎双球菌感染小鼠的保护作用、对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响、对二苯致小鼠耳肿胀的抗炎作用、对醋酸致小鼠疼痛的影响、对内毒素致发热家兔的影响等，申请专利2项。