利用RNAi技术研究猪TLR7在抗PRRSV感染中的作用

TLR7经配体活化后，可引发一系列信号转导通路，导致炎性介质的释放，激发机体的天然免疫应答，在机体抗病毒感染方面发挥重要作用。但类似研究仅限于人类医学等，在动物医学还未见有TLR7参与抗病毒感染直接证据的报道。本项目选用对我国养猪业危害严重的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为对象，采用RNA干扰的方法，在体外沉默猪肺泡巨噬细胞TLR7基因的表达；比较TLR7基因沉默前后的肺泡巨噬细胞抗PRRSV感染活性以及在TLR7配体咪喹莫特（R-837）刺激下产生细胞因子的差异；另外，比较表达猪TLR7基因的猴肾细胞（MARC-145）与正常MARC-145细胞两者之间抗PRRSV感染活性的变化情况，从而阐明猪TLR7分子在抗PRRSV感染中的作用，为猪繁殖与呼吸综合征新型疫苗免疫佐剂的研究奠定基础，亦为基于Toll样受体配体新型疫苗的创制提供新知识、新途径。

本项目成功构建出表达猪TLR7基因GFP融合表达载体pTLR7-EGFP以及表达猪TLR7基因的MARC-145细胞系，并在细胞模型上筛选出有效干扰猪TLR7基因表达的miRNAs（amiRTLR7-3和amiRTLR7-5）。在构建出表达amiRTLR7-3重组腺病毒的基础上，发现重组腺病毒有助于猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）的感染，同时，表达猪TLR7基因的MARC-145细胞系具有抵抗PRRSV感染的作用。本项目阐明了猪TLR7分子在抗PRRSV感染中的作用，为猪繁殖与呼吸综合征新型疫苗的研究奠定了基础。