基于LncRNA-BIC/miR-155调控P38MAPK蛋白磷酸化的温阳振衰颗粒治疗慢性心衰的研究

Chronic heart failure is a complex clinical syndrome which is caused by various kinds of heart diseases that have progressed to serious phase, the 5 year survival rate of patients with clinical symptoms is similar to patients with malignant tumor.Through the previous studies, research group confirmed the expression of phosphorylation of P38MAPK protein is closely positively correlated to CHF, and Wenyangzhenshuai granule could inhibit the phosphorylation of P38MAPK protein expression.As an important P38MAPK upstream regulatory non-coding gene, LncRNA BIC has not been official uploaded to the NCBI gene database until November 15th,2015. Research group found that LncRNA BIC could directly compile miR-155, possibly through MAP3K10 pathway , thus affecting P38MAPK and mediating series of biological activity of the reaction.But the study on the regulation of LncRNA BIC/miRNA-155 to regulate phosphorylation of P38MAPK and the correlation with CHF is still not clear.Based on these, we will intend to conduct experiments both in vivo and vitro , and research gene expression and intervention effects of Wenyangzhenshuai granule on model rats and myocardial cells and explore its effects on LncRNA BIC/miRNA-155 and phosphorylation of P38MAPK protein.

慢性心衰（CHF）是各种心脏疾病进展至严重阶段而引起的一种复杂的临床综合征，有临床症状的患者其5年存活率与恶性肿瘤相仿。课题组通过前期研究，证实了P38MAPK磷酸化（P-P38MAPK）与CHF病情密切相关，且温阳振衰颗粒可显著下调P-P38MAPK的表达。作为P38MAPK上游非编码调控基因，LncRNA BIC于2015年11月15日才正式上传至NCBI基因数据库，且有研究发现LncRNA BIC可直接编译miR-155，可能通过MAP3K10途径影响P38MAPK而介导系列生物活性反应，但LncRNA BIC/miRNA-155对P-P38MAPK的调控与CHF的相关性研究目前仍不清楚。基于此，我们拟进行系统的体内和体外实验，研究在基因过表达和抑制作用下的温阳振衰颗粒干预动物和细胞的疗效及其对LncRNA BIC/miRNA-155调控P-P38MAPK的影响。

本研究通过开展系统的动物和细胞实验，分别构建miR-155 mimic转染后的miR-155过表达心肌细胞和miR-155 inhibitor转染后的miR-155沉默心肌细胞，采用现代分子生物学方法，同时建立CHF动物模型，以LncRNA BIC/miRNA-155调控P38MAPK蛋白磷酸化为切入点，揭示CHF发病过程中P38MAPK信号通路上游调控基因LncRNA BIC/miRNA-155表达的特点和规律，阐释温阳振衰颗粒对其的调控作用，寻找CHF治疗的新靶点。已开展并完成的研究内容有：（1）建立阿霉素诱导的CHF动物模型，采用不同剂量温阳振衰颗粒进行干预，观察温阳振衰颗粒对模型动物的心肌组织形态学的影响，同时进一步分析CHF状态下的心肌组织LncRNA BIC/miRNA-155调控P38MAPK蛋白磷酸化过程的特点和规律。（2）构建miR-155 mimic转染后的miR-155过表达心肌细胞，利用阿霉素干预正常心肌细胞和过表达心肌细胞，观察温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素损伤及miR-155 mimic转染后心肌细胞的干预作用，以及对病理状态下的心肌细胞LncRNA BIC/miRNA-155调控P38MAPK蛋白磷酸化过程的影响。（3）构建miR-155 inhibitor转染后的miR-155沉默心肌细胞，利用阿霉素干预正常心肌细胞和沉默心肌细胞，观察温阳振衰颗粒含药血清对阿霉素损伤及miR-155 inhibitor转染后心肌细胞的干预作用，以及对病理状态下的心肌细胞LncRNA BIC/miRNA-155调控P38MAPK蛋白磷酸化过程的影响。项目3年期限已执行完毕，目前明确了阿霉素诱导的心肌损伤发展过程中LncRNA BIC/miRNA-155调控P38MAPK蛋白磷酸化过程的特点，初步阐释了温阳振衰颗粒对其的影响，阐述了慢性心衰中医病机的现代科学内涵，整体已达到预期研究目标。截止至今，已发表和本研究相关的各级论文9篇，其中含SCI论文2篇，培养博士研究生2名。本研究所使用的被试因素温阳振衰颗粒是湖南中医药大学第一附属医院院内制剂，其基本组方在医院门诊及住院部已经安全、有效地使用了10余年，近三年温阳振衰颗粒销售量为：2018年12.6万元，2019年25.5万元，2020年39.2万元，呈现较好的患者接受度，未来进一步研发的市场潜力较大。