DFRP1增强转录因子Gli1的转录活性促进肝癌细胞增殖的作用和机制研究

DFRP1 (DRG family regulatory protein 1) plays an important role in regulation of cell growth, but its function in tumors has not been reported yet. We previously found that the expression level of DFRP1 in hepatocellular carcinoma tissue was higher than that in adjacent non-tumor tissues and it was an independent prognostic predictor for HCC overall survival. Experiments in vitro showed that DFRP1 can promote the proliferation of a HCC cell line, and also enhance transcriptional activity of Gli1. In this study, we will not only validate the effect of DFRP1 on the proliferation of liver tumor cell, but also reveal the function of DFRP1 in regulating the transcriptional activity of Gli1 and the underlying mechanism using co-immunoprecipitation technique and luciferase reporter system. Furthermore, we will detect the expression levels of DFRP1, Gli1 and Gli1 target genes in hepatocellular carcinoma tissue microarray to analyse their relevance and verify the regulation mechanism of DFRP1 on Gli1. This study will reveal the function and mechanism of DFRP1 in promoting HCC cell proliferation and will be helpful to assess the feasibility of DFRP1 and/or related molecules as a potential therapeutic target for HCC therapy.

DFRP1（DRG家族调节蛋白1）对细胞生长具有重要调控作用，但是与肿瘤的关系未见报道。本课题组前期已证实DFRP1在肝癌组织中高表达，是影响肝癌预后的独立危险因素，体外实验也发现DFRP1能够促进肝癌细胞增殖，并增强Gli1的转录活性。本项目拟进一步在细胞水平研究DFRP1 调控Gli1在肝癌细胞增殖中的作用，并应用荧光素酶报告基因检测及免疫共沉淀等技术研究DFRP1对转录因子Gli1的调控机制；同时在肝癌组织芯片中检测DFRP1、Gli1和受Gli1调控的下游靶基因的表达情况，并进行相关性分析，在临床样本水平验证DFRP1对Gli1的调控。本研究将初步阐明DFRP1促进肝癌细胞增殖的分子机制，为DFRP1及相关分子成为肝癌靶向治疗的靶点提供理论基础。

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第五大常见肿瘤之一，占我国恶性肿瘤死亡率的第二位。HCC 恶性程度高、进展快，复发转移率高，大部分患者确诊时已是中晚期，至今没有令人满意的治疗方法。DFRP1（DRG 家族调节蛋白1）,亦称为ZC3H15（Zinc finger CCCH-type containing 15）,对细胞生长具有重要调控作用，但是与肿瘤的关系未见报道。本项目拟通过研究DFRP1在肝癌中的表达和明确其与HCC 临床病理特征及预后的相关性，以及阐述DFRP1促进肝癌发生发展的机制。相比癌旁组织，在60例新鲜肝癌病人中有52例肝癌患者癌中的DFRP1 表达是升高的。对276 例肝癌组织芯片进行免疫组化染色，结果显示在肝癌组织中DFRP1 高表达。可见，较癌旁组织DFRP1在肝癌中表达明显升高。由Pearson chi卡方检验临床相关性分析显示，DFRP1水平在HCC肿瘤明显升高，与血清AFP表达水平（＞20 ng/mL；P＜0.0064）及血管侵犯（P＜0.0049）相关。Kaplan-Meier分析显示，high-DFRP1患者比low-DFRP1患者更短的总生存率和复发率高。单因素分析显示，DFRP1，血清AFP、乙肝、肿瘤大小、血管侵犯、UICC分期可以作为总生存期（Overall Survival，OS）和 无病生存率（disease-free survival，DFS）的预测指标。多因素Cox回归分析表明，DFRP1与肿瘤大小、HBV和UICC分期与OS密切相关。DFRP1也与DFS相关。因此，DFRP1为OS（P = 0.0101）和DFS（P = 0.0004）的独立预后指标。机制方面，通过研究发现DFRP1促进肿瘤细胞的增殖来促进肝癌的发生发展，进一步研究发现DFRP1是通过增强Gli1的转录活性了促进肝癌细胞的增殖。上述结果表明DFRP1是一个潜在的肝癌治疗的靶点。