利用Caco-2细胞模型研究乳源ACE抑制肽的小肠转运机制

乳源ACE(血管紧张素转化酶)抑制肽是一类来自于乳蛋白且具有抑制ACE活性的多肽，这些多肽的氨基酸序列和肽链长度各不相同，但都具有降低血压的功效。乳源ACE抑制肽经人体口服摄入后，要以活性形式由小肠转运至血液，进入人体体液循环，才能达到降低血压的功效。本项目将采用培养成熟的Caco-2细胞建立乳源ACE抑制肽经人体小肠转运的模型，研究不同结构乳蛋白源ACE抑制肽在人体小肠中的转运机制及代谢稳定性，确定能以活性形式由小肠转运至血液的乳源ACE抑制肽结构特征。为筛选具有较好口服吸收利用度的乳源ACE抑制肽打下基础，也为乳源ACE抑制肽的临床应用提供理论依据。

乳源血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽，是一类来源于乳蛋白，通过抑制ACE活性达到抗人体血压升高的多肽。本课题以Caco-2细胞为模型，探索了乳源ACE抑制肽的肠道转运机制。本课题确立了以固定化瑞士乳杆菌蛋白酶为催化剂，酶解超滤耦联反应器连续制备乳源ACE抑制肽的工艺；建立了Caco-2单层细胞模型，初步探明了乳源ACE抑制肽能由小肠顺利转运的结构特征；并研究了乳源ACE抑制肽的小肠吸收机制及代谢稳定性。研究发现，乳源ACE抑制肽肽链长度、电荷性质、亲疏水性和氨基酸种类对多肽转运量均有影响，肽链长度在四肽以下，疏水性越大，碳端含有脯氨酸的乳源ACE抑制肽小肠吸收较好。考查了三肽VPP和IPP的跨膜转运机制和外排机制，VPP和IPP的主要转运途径是旁路转运，VPP和IPP均存在外排泵作用。研究了六肽RLSFNP经过Caco-2细胞的转运情况，发现只有少量RLSFNP能完整跨过Caco-2细胞到达Caco-2细胞的基底侧，其余RLSFNP被肽酶水解成F、SF、FNP、SFNP和RLSF等片段，细胞转运时加入肽酶抑制剂可显著促进RLSFNP转运，由此证实肠道肽酶的水解是造成长链多肽生物利用度低的原因之一。本研究初步探明了乳源ACE抑制肽结构与肠道完整吸收的关系，为进一步提高功能肽的生物利用度的研究提供了理论基础。