microRNA-206靶向ZFP580调控球囊损伤后平滑肌细胞表型转换的分子机制

It is a new strategy to control the vascular smooth muscle cells( VSMC ) phenotype conversion in order to prevent restenosis after PCI. As the regulators of VSMC phenotypic conversion, MicroRNAs can influence the phenotype conversion of VSMC by down-regulating its downstream target genes expression at the post-transcriptional levels. ZFP580,a novel C2H2 type zinc finger transcription factor cloned by our lab, could modulate the vascular remodeling by means of regulating the proliferation and migration of endothelial cells and VSMC. It was newly confirmed by our lab that microRNA-206 can down-regulate the expression of ZFP580 and promote the conversion of VSMC from contractile to synthetic type. Our project will plan to use lenti virus vector to microRNA-up/ microRNA-down the microRNA-206 of primary VSMC in vitro and to microRNA-down the microRNA-206 in balloon injuried carotid artery of rats in vivo.Furthermore, both the crosslinking-immunprecipitation/high-throughput sequencing and the bioinformatics analysis will be applied to reveal the molecular mechanism of microRNA-206 targeting ZFP580 modulating smooth muscle cell's phenotype conversion after balloon injury. Our study will provide new scientific data to prevent restenosis after PCI.

调控血管平滑肌细胞( VSMC )表型转换是防治PCI术后再狭窄的新策略, microRNA作为VSMC表型转换的调节因子，可通过转录后水平调控下游靶基因表达而影响VSMC表型转换。本组首先克隆的C2H2型锌指核转录因子ZFP580可调控内皮细胞及VSMC的增殖及迁移而影响血管重塑。本组新近实验证实: microRNA-206既可靶向调控ZFP580表达，又可促进VSMC从收缩型向合成型转换。本项目拟采用慢病毒microRNA-up及microRNA-down技术，应用原代VSMC体外实验、球囊损伤大鼠颈总动脉体内实验、紫外交联免疫沉淀结合高通量测序及生物信息学分析，在基因、细胞及动物整体水平上揭示microRNA-206靶向ZFP580调控球囊损伤后平滑肌细胞表型转换的分子机制，为研究和防治球囊扩张PCI术后再狭窄提供新的科学依据。

调控血管平滑肌细胞（VSMC）表型转换是防治PCI术后再狭窄的新策略，microRNA作为VSMC表型转换的调节因子，可通过转录后水平调控下游靶基因表达而影响VSMC表型转换。本组首先克隆的C2H2型锌指核转录因子ZFP580可调控内皮细胞及VSMC的增殖及迁移而影响血管重塑。本组新近实验证实：microRNA-206既可调控ZFP580表达，又可促进VSMC从收缩型向合成型转换。本项目采用microRNA-up及microRNA-down技术，应用原代VSMC体外实验、荧光素酶报告技术、球囊损伤大鼠颈总动脉体内实验探讨了miR-206靶向ZNF580在TGF-β诱导大鼠VSMC表型转换的作用机制；利用PDGFBB刺激复制大鼠VSMC增殖迁移模型、ZNF580基因慢病毒载体构建及转染、大鼠全基因组芯片等实验探讨了ZNF580基因过表达对大鼠VSMC的增殖和迁移的影响及其作用机制；分离培养并鉴定大鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs），腺病毒转染技术获得过（低）表达ZFP580的EPCs与VSMCs共培养，qPCR、Western blot、Brdu、MTT等实验探讨了ZFP580转染的EPCs对VSMCs的增殖、迁移和表型转化的影响及其分子机制；腹主动脉缩窄术(TAAC)构建心肌肥厚大鼠模型；体外培养大鼠心肌细胞H9C2，血管紧张素II(Ang II)诱导心肌细胞肥大，慢病毒转染H9C2细胞，获得过表达及低表达miR-206及ZFP580病毒的心肌细胞，QPCR、Western blot、confocal等实验探讨了P38 MAPK信号通路在miR-206靶向锌指蛋白ZFP580介导的H9C2肥大过程中的可能作用；ATRA不同浓度及不同时间刺激VSMC，研究ATRA对大鼠VSMC分化的影响，在VSMC过表达（低表达）ZFP580基因，研究ZFP580对ATRA诱导的VSMC表型及细胞生物学行为的影响，初步探讨ZFP580发挥这种生物学功能的分子机制及其调控网络，并在大鼠颈动脉球囊损伤模型研究ZFP580过表达（低表达）对损伤内皮的修复作用和对内膜增生的影响。综上所述，本课题应用体内外实验，在基因、细胞及动物整体水平上揭示microRNA-206靶向ZFP580调控球囊损伤后平滑肌细胞表型转换的分子机制，为研究和防治球囊扩张PCI术后再狭窄提供新的科学依据。