经典Wnt途径在RA树突状细胞调节自身反应性T细胞无能和分化中的作用

树突状细胞(DCs)具有免疫应答和致耐受的双重功能。致耐受DCs诱导机体免疫耐受主要通过诱导T细胞无能或分化为调节性T细胞。DCs免疫致耐受异常所介导的自身反应性T细胞过度活化是类风湿关节炎(RA)等自身免疫性疾病发病的中心环节。本项目从探讨调节DCs致免疫耐受的途径和机制出发，以研究经典Wnt途径在RA患者DCs诱导自身反应性T细胞无能和调节其分化中的作用为目标。建立人外周血DCs和RA自身反应性T细胞培养体系，构建β-catenin 基因RNA干扰系统，通过观察1)调节β-catenin对DC成熟的影响和机制；2)调节β-catenin对DC致耐受功能的影响；3)调节RA患者DC中β-catenin对其诱导自身反应性T细胞无能和分化的影响，从而阐明经典Wnt途径在DCs成熟和发挥致耐受功能中的作用和机制，为发现调节DCs免疫功能的分子靶点及其对RA潜在的治疗作用提供理论和实验的依据。

诱导和维持免疫耐受性对防治自身免疫性疾病具有重要的意义。树突状细胞(Dendritic cells, DCs)是目前已知的体内功能最为强大的抗原提呈细胞，是调控免疫反应和免疫耐受的枢纽。本项目旨在探讨诱导DCs发挥致免疫耐受功能的途径和分子机制。课题以经典的Wnt途径在DCs调节自身反应性T细胞无能和分化中的作用为研究目标。研究发现不同成熟状态DCs中Wnt途径信号蛋白存在差异表达，其中经典Wnt途径中主要的下游信号分子β-catenin随着单核细胞向DCs分化过程中表达增加，与胞内GSK-3β分子的磷酸化水平增加密切相关。构建β-catenin的靶向siRNA表达载体，干扰β-catenin的表达可抑制DCs的成熟，并减少DCs刺激T细胞增殖的能力，减少DCs表达IL-23、TNF-α等炎症因子。采用GSK-3β特异性抑制剂SB216763干预DCs可显著增加其胞内β-catenin的水平，从而促进DCs成熟，增加DCs刺激T细胞增殖能力，但并未增加初始T细胞向Th1细胞分化，抑制DCs产生IFN-γ、IL-8、TNF-α等细胞因子的表达。采用外源性Wnt3a激活经典Wnt途径可增加胞内β-catenin的表达，促进DCs分化，但对DCs成熟和刺激T细胞增殖和分化无显著影响。采用外源性Wnt5a刺激DCs未增加胞内β-catenin表达，干预后DCs成熟及刺激T细胞增殖、分化和分泌细胞因子等能力减弱。我们进一步研究了Wnt途径与相关信号通路在DCs中的交互作用。SB216763干预未显著影响IκB磷酸化以及p65的表达。SB216763干预DCs可抑制其MAPK通路磷酸化，p38特异性抑制剂作用DCs后其胞内β-catenin表达及活性显著下降，ERK特异性抑制剂作用DCs后其胞内β-catenin表达及活性有下降趋势，JNK特异性抑制剂作用DCs后其胞内β-catenin表达无明显变化，但活性有所下降。本课题组研究示Wnt/β-catenin信号途径参与调节DCs免疫功能，β-catenin在胞内的积累对DCs表型的成熟起重要作用。外源性Wnt3a并不能充分活化经典Wnt通路，SB216763作为经典Wnt通路的活化剂，促进DCs表型的成熟，调控DCs功能的耐受，其发挥作用不仅通过β-catenin在胞内的积累，同时与调节MAPK通路有关。