疮灵液基于黄蜀葵花组分调控VEGF信号网络以促进缺血性创面愈合的机制研究

Chronic wound is often caused by pressure, diabetes, hormone application and other reasons, which is one of the most common chronic injuries and clinical problems. Research shows that blood supply is vital to the regeneration ability of chronic wound tissue. Therefore focusing on stimulating angiogenesis and improving blood circulation are important in chronic wound research. "Chuang-Ling-Ye", one of formulated preparations in our hospital, has the curative effect on refractory wound with more than 20-year clinical experience. Our previous studies found it had good anti-inflammatory effect. At the same time, one of the effective components, the total flavones of Abelmoschus manihot, promoted vascular endothelial cell proliferation, tubule formation ability, and inhibited its apoptosis. This project intends to use a variety of animal models of chronic ulcer, chick chorioallantoic membrane model combined with human vein endothelial cell culture in vitro, to observe the wound healing process, angiogenesis in wound surface, changes of the cytokine local microenvironment. We focus our research on the mechanism from the upstream and downstream molecular level of VEGF/VEGFR signaling pathway, intending to enrich the Triditional Chinese Medicine theory about "Shou-Lian-Sheng-Ji, Huo-Xue-Hua-Yu" involved in angiogenesis stimulated by Abelmoschus manihot in "Chuang-Ling-Ye", to promote the development of chronic ulcer healing and provide a new method for tissue generating and treatment for the diseases associated with angiogenesis.

慢性创面常源于压疮、糖尿病、激素应用等，是临床常见的难点与热点之一。研究表明，血液供应在组织生长修复中十分重要，因此促进创面血管新生、改善血运是促进难愈性缺血性溃疡愈合的一个重要手段。疮灵液作为我院特色制剂，经20余年临床验证，对于治疗各种难愈性创面，疗效显著。前期基础研究提示其有良好的抗炎效果，同时其有效成分之一黄蜀葵花总黄酮，对于促进血管内皮细胞增生和小管形成能力、抑制其凋亡有明显的作用。本研究拟利用多种动物慢性溃疡模型、鸡胚绒毛尿囊膜模型和人脐静脉内皮细胞模型进一步探讨含不同浓度的黄蜀葵花的疮灵液对慢性溃疡愈合进程、创面血管新生程度、局部细胞因子的影响，并着重从VEGF/VEGFR信号通路的上下游分子水平探讨其作用机制，以期从黄蜀葵花改善血管新生的角度丰富疮灵液之"收敛生肌、活血化瘀"的中医外科理论，为促进慢性溃疡愈合提供新方法，同时也能为其他与血管生成相关的疾病治疗提供新思路。

背景：.慢性难愈性创面是临床常见疾病，而血管新生是创面修复的重要环节。中医药治疗疮疡历史悠久，疗效独到，其“生血”、“生肌”理论符合现代医学之血管新生的概念和内涵。疮灵液是一种不含汞的纯中药外用药液制剂，由黄蜀葵花、大黄、诃子、红花四味中药组成，具有“消炎解毒、活血生肌、收敛止渗”之功效。.目的：.观察疮灵液对慢性难愈性创面修复作用，并从血管新生角度探讨其内在机制，为临床应用疮灵液提供实验依据。.方法：.实验一：建立由压力性、激素诱导性和糖尿病性的慢性难愈性溃疡大鼠模型，通过观察疮灵液对慢性难愈性溃疡大鼠的创面面积和创面愈合率的影响，并通过分子生物学实验方法，观察疮灵液对模型大鼠创面组织中与血管生成相关的细胞因子表达的影响，探讨其促创面修复的作用机制。.实验二：利用鸡胚绒毛尿囊膜模型，观察疮灵液对于尿囊膜血管生长形状、血管数量及密度的影响，进一步证实疮灵液对慢性创面的促血管新生作用。.实验三：以高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）细胞损伤模型，从细胞活力、形态学、凋亡的角度探索疮灵液对于高糖诱导HUVECs细胞损伤模型的影响，并从PI3K/Akt信号通路探讨疮灵液促进内皮细胞血管新生的作用机制。.结果：.1. 疮灵液减少慢性难愈性溃疡模型大鼠的创面面积，提高创面愈合率，促进创面修复。.2. 疮灵液增加慢性难愈性大鼠创面与血管生成相关的细胞因子的表达，提示疮灵液促进慢性难愈性创面的愈合很可能是通过促血管生成和调控血管生成的相关信号通路。.3. 疮灵液增加鸡胚绒毛尿囊膜模型血管数量，促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。.4. 疮灵液可提高受损的HUVECs模型细胞迁移及管腔形成的能力、增加血管生成相关的细胞因子的表达。.5. 疮灵液促进高糖诱导的HUVEC细胞损伤模型PI3K / Akt通路的磷酸化，其促进血管新生的作用可能与PI3K/Akt通路相关。.结论：.疮灵液能促进创面中的血管新生，缩短愈合时间，促进创面愈合，其机制可能是通过VEGF/VEGFR 2及PI3K/AKT信号通路介导。