高效的非病毒打靶载体系统- - 核糖体基因区打靶系统的构建及其在血友病A基因治疗中的应用

基因治疗将是21世纪临床医学中产生重大突破的领域，载体选择是目前基因治疗领域面临的最大难题，尽管病毒载体是目前基因治疗中广泛应用的载体，但其仍存在安全隐患。非病毒载体在基因治疗中的应用从而受到了高度重视。本室已构建了一种新型的非病毒打靶载体- - 人核糖体基因区打靶载体，该载体能将外源性治疗基因定点靶入到人类基因组的核糖体基因区进行有效表达。本研究拟对其同源引导序列长度进行优化，并结合利用能显著提高基因打靶效率的锌指酶，最终建立一个具有较高打靶效率的非病毒打靶系统。本研究还将利用该系统高效地将改造型的hFⅧ基因定点靶入到血友病A基因治疗的靶细胞- - 脐血来源的内皮祖细胞中进行高效、稳定表达，并进行NOD-SCID小鼠ex vivo途径的体内实验研究，为利用核糖体基因区打靶载体系统进行血友病A基因治疗的临床试验奠定重要的基础，同时会为利用非病毒载体进行单基因遗传病基因治疗提供新的思路。