内源分泌型RAGE基因修饰OECs移植治疗糖尿病视网膜病变的实验研究

研究发现内源分泌型RAGE(esRAGE)有望成为防治糖尿病血管病变包括视网膜病变（DR）的重要手段。故本项目拟探讨esRAGE基因转染OECs（Outgrowth endothelial cells）进行细胞移植同时提高视网膜局部esRAGE水平对DR的防治作用。首先，构建esRAGE基因腺病毒载体并转染OECs，观察转染后OECs条件培养液对AGEs诱导下视网膜微血管内皮细胞（RMECs）炎症反应的影响；其后，将转染后OECs通过玻璃体注射到大鼠DR模型视网膜局部中，观察大鼠视网膜组织病变以及毛细血管损伤与修复情况，同时检测视网膜RAGE、NF-кB、VEGF和TGF-β等mRNA和蛋白表达水平，以及细胞凋亡情况。本项目将为DR防治提供一种新的思路，并为esRAGE应用于糖尿病血管病变的防治提供新的理论和实验依据。

外生型内皮祖细胞（outgrowth endothelial cells，OECs）移植已经成为治疗缺血性视网膜疾病包括糖尿病视网膜病变（DR）的一种颇有潜力的策略。晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGEs）与其受体（receptor for AGEs，RAGE）在糖尿病血管并发症中起到重要作用。内源分泌型RAGE（Endogenous secretory RAGE，esRAGE）与AGEs结合可能起到阻断AGEs-RAGE的作用。本研究旨在探讨esRAGE基因修饰OECs移植治疗DR大鼠的治疗作用。本研究成功构建了过表达esRAGE腺病毒载体并转染至OECs（esRAGE-OECs），修饰后OECs具有与OECs类似的增殖和血管修复功能，同时能持续的分泌esRAGE因子。在体内实验中，与DR组相比，玻璃体注射esRAGE–OECs移植治疗4周后DR大鼠视网膜组织的水肿和渗漏明显减轻；同时，与单纯注射OECs组相比，esRAGE–OECs移植治疗组视网膜组织VEGF和TGF-β1的表达水平明显下降。总之，本研究提示esRAGE-OECs移植对DR大鼠视网膜病变具有一定的治疗作用；而且，相比单纯OECs移植，esRAGE-OECs移植可能是治疗DR更好的一种策略。