重组腺病毒调控GHSR-1a基因对心脏重构的影响及机制

The patholigical process of cardiac remodeling after myocardial infarction is involved more than one factor, to explore and discover new anti-remodeling target is important. Ghrelin/GHSR-1a system is a peptide produced by X/A cells and its receptor with cardiacprotective effect. we preliminary date indicated that GHSR-1a overexpression inhibted cardiomyocytes apoptosis, and the GHSR-1a levels are increased in infarcted heart, but the special role and mechanisms of GHSR-1a on cardiac remodeling has not been studied. The project will use western-blot、real-time PCR、flow cytometry and recombinant adenovirus technology, combine primary cultured rat myocardial cells to investigate the influence of GHSR-1a on cardiomyocyte apoptosis and hypertrophy through overexpression and gene interference . Further, in vivo rat model of cardiac remodeling induced by myocardial infarction, the role and mechanisms of GHSR-1a on development of cardiac remodeling will be studied. We will try to provide a new theoretical basis and intervention targets for the post-infarction cardiac remodeling

心肌梗死后心脏重构是一个多因子参与的病理过程，探讨并发现新的抗重构靶点是当前一个重要课题。Ghrelin/GHSR-1a系统是近年发现的由胃内X/A样细胞产生的一种多肽及其受体，具有心血管保护效应。我们的预实验结果显示GHSR-1a过表达抗心肌凋亡，且梗死大鼠心肌GHSR-1a表达上调，但目前国内外尚无关于GHSR-1a对心脏重构的具体作用及其机理的相关报道。本项目将利用原代培养的大鼠心肌细胞，采用流式细胞仪、实时定量PCR、免疫印迹及腺病毒重组等方法在细胞水平探讨GHSR-1a过表达及基因干扰后对心肌细胞凋亡、肥大的影响及其介导的相关信号通路改变； 进一步建立心肌梗死模型，将心脏功能、病理形态学与分子生物学结合，在体研究增高或抑制GHSR-1a基因对梗死后心脏重构的影响及可能分子机制。力图明确GHSR-1a在心脏重构发生发展中的作用并阐明相关机制，为心脏重构提供新的理论依据和干预靶点。

心肌梗死后心脏重构是一个多因子参与的病理过程，探讨并发现新的抗重构靶点是当前一个重要课题。Ghrelin/GHSR-1a系统是近年发现的由胃内X/A样细胞产生的一种多肽及其受体，具有心血管保护效应。我们研究显示与假手术组比较，大鼠心肌梗后3 d、7 d、28 d梗死周边区域心肌中Ghrelin mRNA表达明显降低(P<0．O5)，且呈逐渐下降趋势；而GHSR-1a mRNA表达显著增加(P<0．O5)；梗死3 d组与梗死7 d组差异无统计学意义(P>O．O5)。免疫印迹显示假手术组大鼠心肌显示出了较强的Ghrelin阳性表达，而心肌梗死后Ghrelin阳性表达明显降低(P<O．O5)；与此相反，GHSR—la蛋白表达在梗死后明显增加(P<O．05）。进一步成功构建了GHSR-1a重组腺病毒载体转染大鼠心脏模型，研究GHSR-1a过表达明显改善MI后心室重构，主要表现为增加左室射血分数，左室收缩末期压力及短轴缩短率，减少左室舒张末期内径及舒张末期压力。免疫荧光检测，进一步发现GHSR-1a明显增加梗死边缘区新生血管形成；表现为CD31阳性表达血管数量明显增加；在培养的人脐静脉内皮细胞上，GHSR-1a诱导缺血环境下人脐静脉内皮细胞管腔形成，这可能与GHSR-1a通过调控Akt或/和P38作用与VEGF，从而介导血管生成效应有关。本研究进一步明确了GHSR-1a在心脏重构发生发展中的作用及机制，为心脏重构提供新的理论依据和干预靶点。