利用噬菌体抗体构建导向溶栓药物

构建了库容量为1.7×10(8)的鼠源噬菌体单链抗体库，以血纤维蛋白为选择剂淘选到特异抗体。模拟体内抗体后成熟过程，将特异抗体基因经DNA改组（Shuffling），再从改组库中淘选出高亲和力的特异抗体。对可溶性抗体进行了分离和鉴定。将血纤维蛋白特异单链抗体基因与尿激酶原活性区（144-411）基因片段融合，插入表达载体pET21a，对表达的嵌合体分离并鉴定，结果表明它具有与血纤维蛋白结合以及激活纤溶酶的活性。为使鼠源噬菌体抗体人源化，通过计算机搜索得到已知序列最相近的人源抗体，据此替换掉鼠源血纤维蛋白特异抗体中的构架序列，再次淘选出血纤维蛋白高亲和力的单链抗体，与尿激酶（32kD）融合，经高效表达和分离纯化，证明所构建导向溶栓剂符合预期要求。