乙型肝炎病毒（HBV）S基因突变对隐匿性HBV感染表面抗原血清学检测的影响

S基因突变是隐匿性HBV感染（OBI）的主要原因，研究证实该突变可导致免疫逃逸，造成临床输血筛查的漏检、严重影响输血的安全性。然而，变异S蛋白对乙肝表面抗原（HBsAg）免疫学检测的影响尚未阐明。本课题拟收集OBI患者和年龄、性别、病程等相匹配HBV感染者血清，首先测序分析OBI与S基因突变的相关性；继而采用毕氏酵母表达体系表达纯化主要突变株和对照的重组S蛋白，并采用单一和联合基因位点诱变使突变S蛋白基因的相应位点恢复至野生型，再表达其重组S蛋白；通过观察各重组S蛋白与自身血清、单克隆抗-HBs、多克隆抗-HBs及不同类型商品化HBsAg检测试剂的反应能力，对比分析OBI与对照组之间和突变位点恢复前后反应能力的差别，明确本地HBV基因型OBI中S基因突变对S蛋白反应性的影响。该研究对阐明实验诊断中出现HBsAg检测失败的原因、揭示OBI的发生机制，提高我国HBV检测试剂的质量具有重要意义。

既往研究认为S基因突变可导致免疫逃逸和检测失败，是隐匿性HBV感染（OBI）发生的主要原因。本课题收集OBI患者血清30例和年龄、性别等相匹配HBV感染者血清32例，首先通过测序和统计学计算，分析S基因突变与OBI的相关性，检测OBI血清与不同HBsAg商品化检测试剂的反应性；继而挑选无反应性的OBI突变株，采用毕氏酵母表达体系表达纯化主要突变株和野生型的重组S蛋白；通过观察各重组S蛋白与自身血清、单克隆抗-HBs、多克隆抗-HBs及不同类型商品化HBsAg检测试剂的反应能力，分析突变对S蛋白反应性的影响。实验结果显示，OBI患者病毒DNA水平明显低于HBsAg阳性患者，并存在不同突变株及突变株与野生型混合感染，S基因“a”决定簇点突变与OBI具有显著相关性。OBI血清与HBsAg检测试剂无反应性或反应性非常弱，无反应性的OBI血清对应的突变型和野生型重组S蛋白与自体血清反应性较差，但这些重组蛋白与商品化检测试剂均有反应性。这些结果表明，免疫压力等原因可导致S基因突变而发生OBI，OBI个体内存在HBV免疫逃逸。OBI个体中HBVDNA与抗-HBs的同时存在，可能是突变蛋白的量低于免疫识别的要求或从免疫监视中隐藏了，也可能是是宿主与病毒之间建立了免疫耐受。“a”决定簇突变理论上可导致体外检测抗原抗体结合的失败，但研究结果提示这不是产生OBI的主要原因。OBI的发生可能与多种因素有关，突变导致的低水平病毒复制和HBsAg表达可能是OBI的主要机制，HBsAg血清学检测失败的原因用蛋白量低于检测限解释似乎更合理。本研究对阐明实验诊断中出现HBsAg检测失败的原因、揭示OBI的发生机制具有重要意义。