SCN9A的表达与慢性疼痛的相关性及HSV介导的SCN9A基因沉默镇痛的实验研究

转基因镇痛研究的关键是找到特异的靶点、合适的载体。SCN9A高表达在外周神经元及交感神经节，编码电压门控Nav1.7通道的ａ亚基，其单基因变异导致三种与疼痛相关的遗传性疾病：1、原发性红斑性肢痛症（PE)2、阵发性剧痛症(PEPD)3、先天性无痛症（CIP）。目前，尚未见SCN9A的表达量与慢性疼痛发生发展的关系研究及利用siRNA技术靶向沉默SCN9A镇痛的相关研究。因此本项目拟制作大鼠CCI和SIN疼痛模型，通过RT-PCR、Western-blot等方法探讨SCN9A表达与大鼠疼痛程度之间的关系；设计大鼠SCN9A的siRNA，单细胞膜片钳等方法体外鉴定其干扰效率，筛选出一组有效的干扰片段；构建大鼠SCN9A的siRNA单纯疱疹病毒载体并注射至大鼠足底皮下，评价其靶向性镇痛效应及相关疼痛物质在脊髓的变化。本研究将为SCN9A与慢性疼痛的关系及转基因治疗慢性疼痛机制提供理论与实验依据。

慢性疼痛因其涉及到复杂的调控机理及神经元的结构重塑，很难找到专一、有效、而无副作用的镇痛药，而转基因方法可以在一定程度上增加药物的敏感性和靶向性，本研究寻求了与疼痛密切相关的SCN9A基因，利用病毒载体介导沉默SCN9A基因，采用大鼠慢性神经病理性疼痛模型,通过行为学检测、DRG显微注射给药、RT-PCR、Western blot、免疫组织化学、细胞培养等方法，我们发现：（1）大鼠SNL模型（L5脊神经结扎）引起大鼠术侧后肢机械痛阈和热痛阈值降低。（2）western和免疫荧光结果显示不仅大鼠SNL模型可以引起Nav1.7表达增高，热痛模型大鼠DRG中Nav1.7表达亦升高（3）体内实验，大鼠DRG直接给予带有siSCN9A片段的重组慢病毒载体，可缓解SNL模型大鼠术侧痛敏，并且能够降低由SNL引起的Nav1.7表达增高。（4）体外实验，转染重组病毒于原代培养DRG细胞中，能够抑制以TNF-α刺激方式模拟疼痛环境造成的Nav1.7表达增高。上述结果证实了以转基因方法干扰慢性病理性疼痛大鼠脊神经节中SCN9A编码的Nav1.7α亚基的表达，具有较好的镇痛效应。