峨参石油醚提取物对结肠癌化疗减毒增效和逆转多细胞耐药作用及分子机制

Anthriscus Sylvestris is a pleiotropic untapped Genuine Medicinal Materials that grown in Sichuan with no significant side effects, rich resource and low prices.In recent years, our previous study found that Anthriscus Sylvestris has many effects of enhanced multiple immune function, strengthening the spleen and replenishing qi, promoting blood circulation and removing blood stasis, anti-inflammatory, antitumor etc,The petroleum ether extract parts of Anthriscus Sylvestris have stronger anti-cancer effect. In clinical treatment of chemotherapy for intestinal cancer, the side effects could be significantly reduced and the survival rate of chemotherapy could be improved, but its mechanism is not clear. In this research, by means of simulating clinical colon cancer cells characteristics, with three dimensional culture model of the tumor cells, from the two aspects of cellular level and animal experiment, the petroleum ether extract parts of Anthriscus Sylvestris with 5-FU chemotherapy for colon cancer such as the attenuated , efficiency or promotion of reversal multicellular resistance are explored. The molecular mechanism and signal pathway of its role in enhancing immune, anti-inflammatory, anti-tumor and anti-adhesion etc will be investigated.The results of the research may provide new ideas and strategies to better clinical treatment for colon cancer, which has great practical significance and value.

峨参是一种多效的尚未开发的川产道地中药材，而且无明显毒副作用，价格低廉，药源充足。近年来我们前期研究发现峨参具有增强机体免疫、健脾益气、抗炎、活血化瘀、抗肿瘤等多重功能，其石油醚提取部位抗癌作用最强。临床配合化疗用于肠道肿瘤能明显减轻其副作用，提高（化疗疗效）存活率，但其机制不明。基于此，本课题拟采用肿瘤细胞的三维立体培养模型来模拟临床结肠癌细胞多细胞耐药特性，从细胞水平和动物实验二方面，探讨峨参石油醚提取物配合5-FU化疗对结肠癌减毒、增效甚或促逆转多细胞耐药等的影响，并从增强免疫、抗炎、抗肿瘤、抗粘附等方面探讨其作用的分子机制及信号通路。本课题的研究结果可能为结肠癌的临床治疗提供新的更好的思路和策略，这对于结肠癌的临床治疗进展具有较高的实际意义和价值。

1 峨参石油醚部位的提取、分离、纯化及单体化合物的结构鉴定和抗肿瘤活性筛选：通过提取、分离与纯化，得到16个化合物，其中包括两个新化合物AnthriscusinⅠ、Anthriscinol ethyl ether。经MTT检测，新化合物对于结肠癌细胞有一定的抑制作用。.2 峨参石油醚提取物配合5-FU对结肠癌增效及促进逆转多细胞耐药作用及机制：采用MTT比色法或CCK8法检测后发现，与单独作用的效果相比，峨参石油醚部位与5-FU联用对HT29、DLD-1、HCT116三维多细胞球抑制作用显著增加。用流式细胞计数可发现，峨参石油醚部位与5-FU联合运用后，可将HT29、HCT116结肠癌细胞阻滞于S期以及G2/M期，促进细胞凋亡，可将DLD-1细胞阻滞于S期和G0/G1期，促进DLD-1凋亡。Western Blot技术检测后发现，峨参石油醚提取物联合5-FU抑制了HT29细胞中NF-κB P65、MMP-9蛋白表达和DLD-1、HCT116立体多细胞球模型中p-AKT、iNOS蛋白表达。.3 峨参内酯配合5-FU对结肠癌增效及促进逆转多细胞耐药作用及机制：峨参内酯与5-FU联用对HT29、SW480、SW620、A549、HCT116三维多细胞球抑制作用显著增加。峨参内酯与5-FU联用后，可将HT29、SW480、SW620、A549阻滞在S期以及G2/M期，促进细胞凋亡。峨参内酯联合5-FU对SW480、SW620、A549细胞中FAK、COX2蛋白表达，以及HCT116细胞中FAK，iNOS蛋白表达均有显著抑制作用。.4 峨参石油醚配合5-FU对结肠癌动物的作用及机制： 峨参石油醚联合5-FU可有效抑制裸鼠肿瘤生长。HE染色初步证实峨参石油醚与5-FU联用能够促进肿瘤细胞凋亡，免疫组化方法中发现峨参石油醚与5-FU联用能够降低小鼠中FAK、MMP-9、iNOS、NF-κB的表达。.5 峨参内酯配合5-FU对结肠癌动物的作用及机制：峨参内酯联合5-FU可有效抑制小鼠肿瘤生长，且能改善小鼠胸腺、脾腺指数。HE染色初步证实峨参内酯与5-FU联用能够促进肿瘤细胞凋亡，Western blot和免疫组化方法中发现峨参内酯与5-FU联用能够降低小鼠中PI3K、AKT、NF-κB、BCl-2、FAK、MMP-9、iNOS、CD4，以及增加Bax、CD8的表达。