噬菌体基因敲除与噬菌体基因功能的研究

基因敲除技术是研究未知功能基因的有效手段之一，目前广泛应用于动物、植物及细菌的基因功能研究。这些基因敲除方法都是依据DNA同源重组的原理。噬菌体作为一类非细胞型的细菌病毒，缺乏DNA同源重组的"细胞环境"，难以应用现有的基因敲除技术对其基因功能进行研究。本项目拟通过限制性内切酶酶切、PCR定位删除、DNA片段定位定向重组装等步骤，建立一种新的、适用于快速敲除裂菌性和溶原性噬菌体基因组中任何靶基因或者非编码碱基序列的方法，并通过对我室已完成全基因组测序和注释的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3（GenBank：NO.AY078832）基因组上的3个tRNA基因的敲除研究，一方面证实该方法的可行性和有效性，同时推定PaP3基因组中tRNA基因的功能。本项目的成功实施，将为噬菌体功能基因组学研究、噬菌体基因组的人工定向改造、宿主谱的拓展以及噬菌体治疗等构筑技术平台。