海藻萜提取物对酒精性氧化损伤和肝细胞凋亡的保护作用及机制研究

长期过量酒精摄入可导致肝功能异常和肝纤维化，肝Kupffer细胞活化、氧化/硝化应激、线粒体损伤、Fas/FasL活化等均与肝细胞损伤密切相关。课题组从凹顶藻中获得总萜含量为63.3%的提取物，对其保肝作用进行了初步研究。目前，国内外有关海洋萜类化合物保肝作用研究报道非常有限，其作用机制研究深度和广度不够，亦缺乏系统动物实验和深入的细胞分子生物学实验有力支持。本研究拟从体内外两方面，探讨海藻萜提取物对酒精性氧化损伤和肝细胞凋亡的保护效用，并进行相应分子水平作用机制研究。其中，离体实验主要研究LTE对酒精暴露大鼠肝Kupffer细胞分泌功能及线粒体活力的影响；整体实验主要检测LTE对酒精暴露大鼠抗氧化能力、DNA损伤与修复代谢、肝细胞凋亡、线粒体与微粒体氧化/硝化应激、内源性及外源性凋亡通路等的影响，以此阐明LTE保肝功能及作用机制。这对指导人群合理补充海洋类食品，促进人类健康具有重要意义。

本研究通过建立大鼠酒精性肝损伤模型，以海兔素为干预物，一方面经离体实验证实了海兔素可通过抑制Kupffer 细胞活化起到保肝作用。它可降低内毒素水平，抑制CD14、TLR4和NF-κB mRNA过表达，进而下调促炎细胞因子表达。另一方面经整体实验证实了海兔素对酒精诱发的大鼠肝脏损伤具有明显的保护作用。它不仅可以抑制血清转氨酶及ALP活性的升高、肝脏甘油三酯蓄积，还可有效的改善肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润、肝细胞内亚细胞器病变程度等病理损伤。另外，海兔素对酒精所致的酒精代谢酶活性及表达增高、红细胞膜流动性下降、肝细胞DNA损伤和凋亡也有显著的抑制作用，其保护作用的机制与调控乙醇代谢酶，提高机体抗氧化能力、减轻脂质过氧化和DNA的氧化损伤以及抑制硝化应激，改善肝线粒体结构和功能损伤，减轻Fas/FasL过表达，从而阻断内源性、外源性凋亡信号通路的活化有关。本研究同时建立和完善DNA损伤与修复微形态学技术，可为DNA损伤与修复功能研究提供一个新的分析平台，初步建立的无伤害细胞生物学检测技术可用来评价机体接触有害因素的程度。这些为今后开展相关研究提供了重要的方法学基础。本研究也为丰富营养分子生物学的理论、指导人群合理利用海洋食物资源，增进健康提供了科学依据，具有良好的应用前景。