骨靶向亲和性引经药与"肾主骨"信号转导相关性研究

研究假说："肾主骨"引经药存在骨亲和性的"靶向子"( targeter)，对其主动寻靶特性和靶点信号转导起关键作用。.在已经完成的"补肾方药的归经与特异性转录因子相关性研究"（30472200）基础上，进一步针对"肾主骨"引经药，用高通量筛选和现代分离提取技术（SFE、MMA、HPLC、HPCE、UV、IR、NMR、LC-MS、GC-MS）分析引经药是否有特殊的引经载体结构？在实验动物，引经药对骨及子宫芳香化酶是否有特异性？OB培养，模拟雌激素衰退，检测引经药血清对骨吸收抑制因子（OPG）和OB 优势表达的雌激素受体ER 亚型（α或β）是否有靶向调节？利用RNAi 技术建立优势ER 亚型沉默表达的成骨细胞，分析其pERK1/2 表达及细胞增殖与凋亡，解析引经药对ER 亚型介导的靶点信号转导的调节作用。并通过不同剂量引经药临床观察OP相关特异性指标，可望阐明应用大、小药引子两种争论的观点。

本课题入肾经的5味引经药是：淫羊藿、牛膝、骨碎补、补骨脂、川续断，用高通量筛选分离提取技术提取成分，淫羊藿苷、牛膝蜕皮甾酮、柚皮苷、补骨脂素、川续断皂苷 VI，按照“引经药-靶向亲和性先导化合物-靶器官- 受体- 靶基因”的思路，探讨“肾主骨”引经药主动寻靶信号传导途径。.淫羊藿苷可调节去卵巢骨质疏松大鼠的下丘脑不同核团ERβ mRNA表达水平，使下丘脑弓状核ERβ mRNA表达明显升高，下丘脑室旁核、视上核ERβ mRNA表达明显降低，下丘脑和海马ERα、ERβ mRNA表达明显升高。淫羊藿苷元磷脂复合物可使血清 ALP、u-Ca、D-Pyr/Cr 排出量降低，股骨密度、骨钙、骨磷、腰椎生物力学参数，胫骨上段静态参数，动态参数均增加，能抑制去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强，提高骨密度，增强腰椎抗压生物力学性能。3H-牛膝蜕皮甾酮在体内的动态定量分布药动学，较集中分布于肝脏、肾脏、肾上腺、小肠和肺等器官，其药-时过程符合二室开放模型特征，符合线性动力学，对组织器官选择性分布特点同牛膝归经及脏腑的络属关系基本一致。柚皮苷能通过上调 c-fos mRNA 表达，补骨脂素能通过上调骨保护素、核因子 - κ B 受体激活配体 mRNA 表达及 OPG / RANKL 比例，促进成骨细胞的生成功能，增强骨更新。川续断皂苷 VI 能显著提高 MSCs 分化为成骨细胞的 ALP 活性和骨钙素的含量，使 Cbfα1 mRNA 的表达升高。由5味引经药配伍打老儿丸，组成密骨打老儿丸，对去卵巢骨质疏松大鼠发挥“归经”作用，至少在骨、性腺和下丘脑几个靶点起作用，使骨组织雌激素受体α和β mRNA表达下降，T/E2、CT/PTH、TBV、TBS、TFS、LBGR、AFS、MAR、BFR升高，TRS下降，骨密度升高，增强腰椎抗压生物力学性能。密骨打老儿丸含药血清在成骨- 破骨细胞共同培养体系中第 6 d、7 d 能显著降低破骨细胞骨吸收陷窝的数目和分泌抗酒石酸酸性磷酸酶的活性，抑制破骨细胞骨吸收功能。临床观察大、小药引子不同配伍比例的补肾方药治疗经络辩证骨质疏松患者，观察骨痛等症状与腰椎 L2 – 4 骨密度、血清 Ca、碱性磷酸酶、骨钙素、尿羟脯氨酸、尿钙、尿肌酐、雌二醇、睾酮等，综合疗效评价结果：大药引子配伍补肾方药治疗经络辩证属于肝肾经的骨质疏松症，“大药引子”疗效更好。