RABVL/CCL5双特异核酸适配体-RVG29-9R短肽嵌合体的构建及其抗狂犬病活性研究

Rabies is an acute infectious disease caused by rabies virus in central nervous system, belongs to zoonotic natural focus disease, death rate is almost 100%, is the highest human fatality rate of acute infectious disease by far, and has no effective treatment. Host immunity and virus proliferation play an important role in the pathogenesis of the disease, and the key for the treatment of rabies is to break through the blood-brain barrier. This project aims to screen aptamers against the host chemokine CCL5 and viral L protein by SELEX technology, then linked the two aptamer with nucleotide linker and conjugated with the brain targeted peptide glycoprotein RVG29 derived from rabies virus to be chimera, and the anti-rabies effect of aptamer-RVG29-9R chimera was assessed by in vitro and in vivo experiments. This project may develop a new type of safe and noninvasive targeted drug for rabies, and provide a new way for the treatment of central nervous system diseases.

狂犬病是由狂犬病病毒侵害人或温血动物的中枢神经系统引起的急性传染病，属人畜共患的自然疫源性疾病，致死率几乎100%，是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，至今无有效治疗方法。宿主免疫和病毒增殖对其致病起主要作用，而突破血脑屏障是其治疗的关键。本项目拟采用SELEX技术针对宿主趋化因子CCL5和病毒L蛋白两个靶标筛选相应的核酸适配体，再通过核酸连接臂构建抗狂犬病的双特异核酸适配体，与具有脑靶向效果的狂犬病毒糖蛋白RVG29衍生短肽形成能够跨越血脑屏障的嵌合体，并通过体内外实验验证制备出的双特异性核酸适配体-RVG29-9R嵌合体的抗狂犬病效果，以期实现安全、无创伤性的新型狂犬病靶向治疗药物的开发，为中枢神经系统疾病靶向治疗提供思路。

狂犬病是由狂犬病病毒侵害人或温血动物的中枢神经系统引起的急性传染病，属人畜共患的自然疫源性疾病，致死率几乎100%，是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，至今无有效治疗方法。宿主免疫和病毒增殖对其致病起主要作用，而突破血脑屏障是其治疗的关键。本项目通过制备具有生物活性的趋化因子CCL5重组蛋白和狂犬病毒L蛋白片段，并采用SELEX技术对两个靶标进行筛选，分别借助高通量测序和常规单克隆挑选并测序的成功获得并鉴定1条和2条特异性核酸适配体，并且二者具有良好的趋化活性抑制能力和体外抗狂犬病毒活性。进一步通过互补性核酸连接臂的添加，组合构建出具有两种不同活性的双特异核酸适配体，与原核表达系统表达、纯化的具有脑靶向效果的狂犬病毒糖蛋白RVG29衍生短肽通过9R的静电相互作用结合形成嵌合体，通过尾静脉给药方式处理狂犬病毒攻毒小鼠，能够显著延长攻毒小鼠的存活时间。总之，本研究制备的能够跨越血脑屏障的双特异性核酸适配体嵌合体具有体外抗趋化因子5趋化活性的能力及抗狂犬病活性，在体内也成功实现延长狂犬病毒感染小鼠存活时间的效果，为下一步改进给药方式、增加分子活性及延长药物半衰期提供了关键性药物前体分子，进而实现安全、无创伤性的新型狂犬病靶向治疗药物的开发提供了可能，为中枢神经系统疾病靶向治疗了提供了新思路。