人源志贺菌对鸡感染机制的研究

本项目通过人源、鸡源志贺菌对鸡肠袢模型和肠道组织培养物的黏附与侵袭试验以及侵袭动力比较，进一步确定人源志贺菌侵染鸡肠道上皮细胞的能力和对鸡的致病性。然后，应用免疫组化染色和Northern印迹杂交检测鸡肠道上皮细胞是否存在志贺菌在侵入所需的α5β1 整合素和CD44受体，并通过RNAi技术沉默受体基因的表达对志贺菌侵袭力影响的研究，确定鸡肠道上皮细胞相应受体的功能。最后，应用信号转导抑制剂对可能参与志贺菌侵袭的信号转导途径进行抑制后对志贺菌侵袭力的影响以及侵入过程中F-肌动蛋白重新分布状态的观察，研究细胞信号转导途径和细胞骨架在志贺菌侵入鸡肠道上皮细胞过程中的作用。本项目旨在阐明人源志贺菌对鸡感染的机制，解释志贺菌获得感染鸡的能力的原因，对于进一步揭示志贺菌的致病机理和理解宿主谱扩大的机制有重要意义。

志贺菌为肠道感染病原菌，自然情况下只感染人类和非人类灵长类动物，2004年首次报道鸡志贺菌病病例，主要以雏鸡脓血痢为特征。从基因水平上看，鸡源志贺菌与人源志贺菌高度同源，可能起源于人源志贺菌，或是其新的亚种。本项目拟在利用鸡肠袢模型和肠道组织培养物研究人源志贺菌侵袭特性基础上，从侵入所需受体鉴定及功能研究和细胞信号转导途径及细胞骨架在志贺菌侵入鸡肠道上皮细胞过程中的作用进行研究，以阐明人源志贺菌对鸡感染的机制，解释志贺菌获得感染鸡的能力的原因，进一步揭示志贺菌的致病机理和理解宿主谱扩大的机制。. 本研究建立了鸡肠袢模型和原代肠上皮细胞制备与培养方法，并在此基础上确定了人源志贺菌对鸡肠上皮细胞的侵袭能力和特性，解释了志贺菌获得感染鸡的能力；利用建立的荧光定量PCR方法检测到鸡肠上皮细胞上α5β1整合素和CD44受体的表达及表达时空特性，且与志贺菌对鸡感染特性相一致，推测该受体是志贺菌侵袭过程中起到相应作用，在利用RNAi对其功能进行研究时，受到鸡原代肠上皮细胞培养特性限制而未能取得有益结果；在人源志贺菌侵袭鸡肠上皮细胞机制研究中，发现染料木黄酮、硝苯地平和细胞松弛素B能显著抑制人源福氏志贺菌ZD02株内化，人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞时F-肌动蛋白发生聚集，结果表明酪氨酸蛋白激酶、Ca2+通道活化等细胞信号通路以及细胞微丝重排在其中起到重要作用，从中可阐明人源志贺菌对鸡感染机制。研究结果表明，志贺菌具有感染人、禽的能力，具备人-禽交互传播的可能性，具有重要公共卫生意义。. 本项目总体上完成了项目计划书任务要求，取得了一定的研究结果和成果。共直接培养硕士研究生3名，发表论文6篇，录用待发表3篇，会议论文2篇，待发表论文1篇。项目经费使用严格按照预算执行，目前经费结余7400元，用于支付版面费及尚未结算试剂材料费。