T细胞的前列腺素D2受体亚型1在血管紧张素Ⅱ诱导的高血压中的作用机制研究

T lymphocytes play important role in the development of hypertension, but its specific regulatory mechanism has not been fully elucidated. We observed the expression of Prostaglandin D2 receptor subtype 1 (DP1) in T lymphocytes was high and increased with the stimulation of angiotensin Ⅱ (AngⅡ); Conditional deletion of DP1 receptor in T cells can significantly augment the mice hypertensive response to AngⅡ with higher activation of Th1 cells；meanwhile, the degradation of Th1 transcription factor T-bet and the transcription of E3 ligase NEDD4L were decreased when DP1 deleted; moreover we screened out the SP1 binding site on the promoter region of NEDD4L. Collectively, the DP1 signaling in T cells may decrease the mice hypertensive response to AngⅡthrough SP1/ NEDD4L/T-bet axis induced inhibition of Th1 activation. In this proposal, we'll use neutralizing antibody, T-bet -/- mice and NEDD4L specific over-expression mice in T cells to explore the role of Th1 cytokines, T-bet and NEDD4L in DP1 deletion mediated hypertension; Lastly to explore the mechanistic regulation of DP1 and NEDD4L by molecular biology techniques. This study aims to reveal the function and regulation of DP1 axis in T cells during the development of hypertension, to enrich the immune regulation mechanism during hypertension and provide new therapeutic targets for the immunotherapy of hypertension.

T细胞在高血压的发生发展中发挥重要作用，但分子机制不清楚。我们发现：前列腺素D2受体亚型1（DP1）在T细胞高表达，且在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激后表达升高；小鼠T细胞敲除DP1后，AngⅡ诱导的高血压扩大，Th1活化增强，Th1转录因子T-bet蛋白质降解减少，E3 连接酶NEDD4L转录降低，且发现NEDD4L上存在SP1的调控位点。推测T细胞中DP1通过SP1/ NEDD4L/T-bet通路抑制Th1活性进而抑制AngⅡ诱导的高血压。我们将通过中和抗体、T-bet-/-小鼠和NEDD4L过表达小鼠来探讨Th1细胞因子、T-bet和NEDD4L在T细胞DP1受体敲除介导的血压升高中的作用；通过分子生物学手段探索DP1与NEDD4L 之间的调控机制。该研究旨在揭示T 细胞中DP1 信号通路在高血压中的作用及机制，丰富T细胞免疫调节高血压的作用机理，为高血压的免疫治疗提供新的治疗靶点。

血压通常会随着年龄的增长而升高，但确切机制仍未完全阐明。已知随着年龄的增长，T淋巴细胞中促炎细胞因子的表达水平增加，PGD2（前列腺素D2）是一种促进炎症消退的介质，它可以通过作用于DP1 (D-prostanoid receptor 1)受体抑制Th1细胞因子的分泌。在本研究中，我们旨在研究T细胞中PGD2 / DP1信号通路在老年性高血压中的作用与调控机制。为阐明随年龄增长的T细胞中DP1受体的病理生理功能，我们募集年轻和老年男性志愿者，对其外周血中CD4+ T细胞进行基因表达，前列腺素生成和蛋白质印迹分析。结果显示在老年人和衰老小鼠的CD4+ T细胞中PGD2 / DP1轴显著下调；在构建并繁殖的CD4+ T细胞DP1缺失的小鼠中（TDP1KO）发现，衰老的TDP1KO 小鼠通常伴随更多的Th1细胞因子的分泌，血管重塑，CD4+ T细胞的浸润以及血管和肾脏中超氧化物的产生，进而导致更高的血压值；另一方面，T细胞中外源DP1的过表达（CD4-DP1-Tg）可通过减少Th1细胞因子的分泌来延缓衰老相关的血压升高。肿瘤坏死因子α的中和或干扰素γ的缺失可显著改善DP1缺失的TDP1KO小鼠中衰老相关的血压升高。在机制上，我们发现，DP1通过活化PKA（蛋白激酶A）促进Sp1的磷酸化，磷酸化的Sp1入核进而促进E3泛素连接酶NEDD4L的表达，NEDD4L可以促进Th1特异性转录因子T-bet 的泛素化降解来抑制Th1的活性。动物实验中发现T-bet的缺失或CD4+ T细胞中NEDD4L的过表达（CD4-NEDD4L-Tg）均可以减轻TDP1KO小鼠中衰老相关的血压升高。最后，在治疗应用中结果显示DP1受体激动剂BW245C可显著降低老年小鼠的血压值，并伴随有降低的血管/肾脏超氧化物水平。综上所述，PGD2 / DP1信号通路通过增加NEDD4L介导的T-bet泛素化降解来抑制衰老相关的血压升高及伴随的高血压反应。因此，T细胞中DP1受体有望成为治疗老年性高血压的新的靶标。相关文章发表在心血管领域顶尖杂志Circulation；另外，在 Sci China Life Sci杂志发表标注该项目资助的 SCI 研究论文 1 篇；相关成果申请专利 1 项。