重组人FcγRIIB在系统性红斑狼疮B细胞激活中的作用

本项目以可溶性和膜结合性的重组人FcγRIIB为研究对象，利用分子生物学技术，获得可溶性和膜结合性的重组人FcγRIIB，分别检测其与人和小鼠免疫复合物的结合情况，评价其生物学活性；通过体外检测其对SLE患者和模型鼠B细胞分泌抗体、浆细胞凋亡反应、B细胞信号转导分子Lyn 、SHIP、 Dok 、BTK及其mRNA表达的影响；探索FcγRIIB体外对系统性红斑狼疮B细胞的免疫调节作用；利用SLE模型鼠观察可溶性和膜结合性 FcγRIIB 的体内作用，分别观察SLE模型鼠的皮肤、关节、脑、心、肝、肾脏病理改变及免疫复合物的沉积，检测SLE模型鼠血清中ANA及外周免疫器官中B细胞的FcγRIIB表达水平及信号转导分子的变化；揭示可溶性和膜结合性FcγRIIB两者之间在体内外对系统性红斑狼疮B细胞的作用及其差异性，为进一步研究奠定基础。

构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体，测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL，调节病毒滴度达105TU/mL。慢病毒载体介导的FcγRIIB基因可在人B细胞稳定表达并下调IgM、IgG抗体的分泌水平；抗体分泌降低可能的机制是FcγRIIB活化影响下游Btk,Lyn,DOK-1和SHIP蛋白的磷酸化水平且促进B细胞凋亡。. 构建了原核重组质粒pET-sFcγRIIb，诱导表达并纯化获得重组FcγRIIb胞外区蛋白；SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人，重组蛋白husFcγRIIb可与血清中免疫复合物结合，抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活，减少IgM、IgG抗体的分泌，为进一步研究可溶性FcγRIIb的生物学作用奠定了基础。. 分别通过尾静脉注射小鼠FcγRⅡB慢病毒表达载体和可溶性FcγRIIB重组蛋白到MRL/lpr SLE小鼠体内，均可减少MRL/lpr SLE小鼠尿蛋白、自身抗体含量，延缓MRL/lpr SLE小鼠的病情进展,可能是防治系统性红斑狼疮的一个新途径。