抗炎活性脑通透肽MLIF防治缺血性脑卒中新靶点研究

抗炎活性脑通透肽MLIF是我们上一项国家自然基金中发现的具有显著防治缺血性脑卒中功能多肽。通过生物素标记的五肽进行蛋白间pull-down作用以及生物质谱鉴定，我们发现MLIF通过与胞内受体X15直接结合作用，上调脑血管eNOS的表达，保护缺血性脑损伤。本项目在此基础上，拟构建X15不同剪接体，通过pull-down试验明确MLIF与其靶点X15结合活性区域；构建X15的表达及shRNA干扰慢病毒载体，在脑血管内皮细胞损伤、缺氧/复氧、离体基底动脉条收缩、脑缺血再灌注等病理模型中观察X15在缺血性脑卒中的功能；进行MLIF与靶点X15构效关系研究，进一步优化抗炎活性脑通透肽，为脑血管疾病提供新的靶点和新活性多肽。通过确认活性肽MLIF防治脑卒中新靶点X15的功能和干预环节，为脑卒中防治提供新的思路。

本课题在前期发现的具有显著防治缺血性脑卒中活性多肽MLIF及其靶点eEF1A1的基础上，构建eEF1A1的不同剪接体，通过pull-down和激光共聚焦试验明确MLIF与eEF1A1的D1结构域结合；构建eEF1A1的干扰慢病毒载体，在MCAO大鼠脑室内注射eEF1A1的干扰慢病毒，观察eEF1A1在缺血性脑卒中的功能及MLIF的作用，发现注射eEF1A1的干扰慢病毒能够削弱MLIF的脑缺血保护作用；采用eEF1A1的siRNA进一步在脑血管内皮细胞中观察其在脑缺血中的功能，发现eEF1A1能够调节炎症因子IL-1β、TNF-及粘附分子VCAM-1的水平，参与脑缺血的过程。本课题发现了脑缺血的新作用靶点eEF1A1，有望成为防治脑缺血新的潜在的靶点，为脑血管疾病的治疗提供新的思路。