基于UPLC Q-TOF MS/MS技术的四物汤血清化学研究

只有了解中药化学成分的体内过程，才能发现真正的药效成分，有助于揭示药效物质基础并阐明药物的作用机制。"血清化学"作为研究中药化学成分体内过程的主要方法，越来越受到中药学界的重视。四物汤有确切的临床疗效，因而具有重要的研究价值。但目前其血清化学研究开展很少，所获得的知识也十分粗浅，制约着其现代研究的深入。本研究将近年出现的比常规HPLC技术分析效率更高的UPLC，以及定性分析能力较强的高分辨Q-TOF MS/MS等新技术运用到四物汤血清化学研究中，对四物汤含药血清中的小分子化学成分进行研究，考察四物汤含药血清中药物相关小分子化学成分的组成、含量及其随时间变化的规律，探索四物汤口服后其化学成分的体内过程，为以后四物汤的深入研究，促进四物汤的临床合理用药以及在古方基础上的新药创制，提供研究线索和参考数据。

运用UPLC- QTOFMS/MS技术，成功建立定性定量分析方法，对单次四物汤给药大鼠血清的药物相关化学成分进行了定性定量研究。从含药血清中鉴定出了多种四物汤的功能性成分，如阿魏酸，疑似阿魏酸硫酸酯、芍药苷、芍药内酯苷、地黄苷D、丁烯基苯酞等。确认了四物汤煎液中的游离果糖几乎全部来源于君药熟地，印证了果糖与补血的密切关系。发现大鼠灌胃四物汤后血清果糖浓果糖达峰时间小于60min，最高浓度约1.0mg/dL，仅为基线水平的2～3倍，消除迅速，180min时已降低至基线水平，提示其快速吸收代谢。发现大鼠灌胃四物汤后，血清芍药苷和芍药内酯苷达峰时间分别为20和30min，达峰浓度分别为198.4和70.7ng/mL，半衰期分别为29.6和26.9min，且以较低浓度在机体中持续存在至10h之后。四物汤灌胃10min时阿魏酸的血药浓度产生了一个高峰，随后快速下降到较低水平，并持续至30min，而后在体内几乎无法再看到阿魏酸的原型成分的存在。同时，疑似阿魏酸的Ⅱ相代谢产物——阿魏酸硫酸酯的达峰时间约为30min，其在机内的持续时间相当长，在四物汤入体600min后依然可以检测到。自主创制国内第一款可用于中药复杂成分快速鉴别的高分辨电喷雾离子化质谱数据批量自动化预鉴别软件，和国内第一款离线化（本地化）的“人类代谢组数据库HMDB（Human Metabolome Database）”，以及第一款SD大鼠血清和尿液LC-MS实测信号数据库，为含中药生物样品中内源性成分的鉴别提供了强有力的技术支撑。此外运用配对比较策略，深入探讨了地黄、白芍的有效化学成分。